[发明专利]表达HLA-G7异构体标准蛋白的细胞株及其应用

说明书

本发明提供了表达HLA‑G7异构体标准蛋白的细胞株，保藏机构为：中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO:C202017。其能够稳定表达HLA‑G6异构体标准蛋白，能在人类白细胞抗原‑G异构体分子HLA‑G7流式细胞术、免疫印迹、组织及细胞免疫组化、HLA‑G异构体功能研究及特异性抗体开发筛选作为标准参照物等应用。

技术领域

本发明属于生物工程领域，特别涉及已知7种人类白细胞抗原-G(HLA-G)异构体分子 (HLA-G1、-G2、-G3、-G4、-G5、-G6及HLA-G7)表达载体构建及稳定表达的细胞株，可作为特定HLA-G异构体分子(HLA-G1、-G2、-G3、-G4、-G5、-G6及HLA-G7)流式细胞术、免疫印迹、组织及细胞免疫组化、HLA-G异构体功能研究及特异性抗体开发筛选作为标准参照物等应用。

背景技术

人类白细胞抗原-G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)基因，全长6.0kb，位于人类第 6号染色体短臂远侧6p21.3。在蛋白质翻译过程中，HLA-G mRNA第1外显子编码信号肽，第2、3和第4外显子分别编码细胞外区的α1、α2和α3结构域，第5位外显子编码跨膜区；第6外显子编码仅含6个氨基酸残基的HLA-G分子胞内段；由于外显子6内含有终止密码子，第7外显子不被转录；第8外显子对应于HLA-G基因的3′UTR。

HLA-G初始转录产物经选择性剪接，可产生7种成熟mRNA，分别编码7种不同分子量的异构体分子(HLA-G1、-G2、-G3、-G4、-G5、-G6及HLA-G7)。HLA-G1是由全长HLA-G mRNA编码，结构上类似于HLA Ia抗原分子。HLA-G2缺乏α2结构域；HLA-G3缺乏α2 和α3结构域；HLA-G4缺乏α3结构域；HLA-G5及HLA-G6胞外区结构域分别与HLA-G1 及HLA-G2相同，但它们由含有内含子4的HLA-G mRNA编码，因内含子4中含有终止密码子，所编码的蛋白分子缺乏由外显子5所编码的跨膜区，形成可溶性HLA-G分子。编码 HLA-G7的mRNA由于内含子2中含有终止密码子，胞外区仅含α1结构域及由内含子2所编码的2个氨基酸残基相连(图1)。HLA-G1～-G7异构体分子的分子量分别为39kD、31kD、 23kD、30kD、37kD、27kD及16kD。

生理情况下，HLA-G分子仅表达在母胎界面的绒毛外滋养层细胞，在维持母胎免疫耐受中起重要作用。病理情况下，HLA-G分子能在多种肿瘤细胞及病毒感染等组织细胞中诱导性表达，与疾病的发生及进展密切相关。目前已广泛认同HLA-G分子是体内一个重要的免疫致耐分子，其免疫抑制功能主要通过结合免疫抑制性受体免疫球蛋白样转录物-2(immunoglobulin-like transcript-2,ILT2/LILRB1/CD85j)、免疫球蛋白样转录物-4(ILT4/LILRB2/CD85d),传递抑制信号，诱导免疫耐受。具体作用机制有：①与表达在T 细胞、NK细胞和B细胞上的ILT2结合，抑制T细胞和NK细胞免疫杀伤活性，及B细胞增殖和抗体分泌等功能。②与树突状细胞(DC)上的ILT2、ILT4结合，抑制DC细胞的成熟和分化，诱导产生耐受性DC细胞。③与骨髓来源抑制性细胞(MDSC)和巨噬细胞(Mφ) 上的ILT2、ILT4结合，诱导促炎抗肿瘤的M1向免疫致耐性M2细胞分化。因此，HLA-G分子是机体内一个重要的免疫耐受分子。

此外，HLA-G与受体ILT2、ILT4结合，具有分子结构特异性。受体ILT2、ILT4与HLA-G结合的位点HLA-G胞外区α3结构域。ILT2仅结合HLA-G/β2m复合物，而ILT4不仅可以与 HLA-G/β2m结合，同时可以与不含β2m的游离HLA-G分子结合。由于HLA-G1、-G2、-G3、 -G4、-G5、-G6及HLA-G7在表达机制及分子结构上存在差异，如HLA-G3、-G4、及HLA-G7 不含α3结构域，不能与ILT2和ILT4结合。因此，不同HLA-G异构体分子可在病理生理过程中发挥特定的免疫学效应。