[发明专利]识别猪eIF4G1基因的sgRNA及其编码DNA和应用

说明书

本发明提供了识别猪eIF4G1基因的sgRNA及其编码DNA和应用。该sgRNA特异性识别猪eIF4G1基因的sgRNA识别猪eIF4G1基因的第16外显子，且用于CRISPR/Cas9系统，含有如序列1、序列2和序列3所示的负责识别靶片段的序列。本发明提供的特异性识别猪eIF4G1基因的sgRNA能够特异性识别猪eIF4G1基因的第16外显子，且本发明提供的sgRNA用于CRISPR/Cas9系统。本发明通过实验发现，该sgRNA配合CRISPR/Cas9系统，敲除效率分别为70％、45％和50％，能够高效的对猪eIF4G1基因进行基因编辑操作，可实现猪细胞或者个体的基因功能研究以及抗病育种等方面的应用。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其是涉及一种识别猪eIF4G1基因的sgRNA及其编码DNA和应用。

背景技术

猪是我国重要的家畜品种之一，其在农业经济、医学疾病模型和分子遗传学研究中均有重要地位。而基因编辑猪在生物学研究、农业新品种培育以及生物医药研究中具有重要的应用价值，CRISPR/Cas9系统的出现极大的提高了猪的基因编辑效率。

eIF4G1基因的全称是整合翻译起始因子4γ1(eukaryotic translationinitiation factor 4 gamma 1)，该基因编码的蛋白质是多亚基蛋白质复合物EIF4F的组成部分。该复合物促进mRNA募集到核糖体，这是蛋白质合成起始阶段的限速步骤。mRNA帽的识别和5'-末端二级结构的ATP依赖性解旋由该复合物中的因子催化。多种动物病毒能够表达降解eIF4G1的蛋白酶，从而劫持宿主mRNA翻译和蛋白合成工厂，利用其合成病毒自身蛋白。

因此对猪eIF4G1基因进行基因编辑，改变或者修饰eIF4G1基因编码序列，有望打破病毒对宿主mRNA翻译和蛋白合成工厂的劫持，从而避免病毒的感染，对猪的基因功能研究、新型基因编辑猪的制备和培育具有重要的应用价值。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种sgRNA。

本发明提供的sgRNA，其靶序列为猪eIF4G1基因的第16外显子或其上任意片段。

上述sgRNA的靶序列为如下a1-a4中任一种：

a1)、核苷酸序列为序列8；

a2)、核苷酸序列为序列9；

a3)、核苷酸序列为序列10；

a4)、将a1)-a3)中任一核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的核苷酸。

上述sgRNA为如下b1)-b5)中任一种：

b1)、含有序列1的核苷酸序列；

b2)、含有序列2的核苷酸序列；

b3)、含有序列3的核苷酸序列；

b4)、由b1)-b3)中所示的sgRNA任两种组成；

b5)、将b1)-b4)中任一核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的核苷酸。

上述sgRNA为如下c1-c5中任一种：

c1)、核苷酸序列为序列4所示；

c2)、核苷酸序列为序列5所示；

c3)、核苷酸序列为序列6所示；

c4)、由c1)-c3)中所示的sgRNA任两种组成；

c5)、将c1)-c4)中任一核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的核苷酸。