[发明专利]一种测定蛋白溶解度的方法

权利要求书

1.一种测定蛋白溶解度的方法，特征如下，经过如下的步骤测定目标蛋白溶解度：

溶剂预处理：缓冲液或水作为溶剂，都用0.22 um微孔滤膜过滤去除颗粒；

样品梯度稀释：所述蛋白浓度指蛋白全部溶解的理论浓度或总浓度；对浓度2.0 g/L以上的液体蛋白样品用所选溶剂直接进行梯度稀释，对干粉或固体蛋白样品先用所选溶剂溶解到2.0 g/L以上再进行梯度稀释；所得样品系列的蛋白浓度用C_i表示，且按蛋白浓度从低到高依次编号为i，其中i为整数，起始值为1，最大为样品数量n；梯度稀释所得蛋白样品系列中，最高蛋白浓度2.0 g/L，最低蛋白浓度0.2 g/L且样品中无目测可见的颗粒；

共振散射信号测量：在与激发光垂直方向上或与激发光夹角大于75度而小于105度方向上、与激发波长相同的发射信号，称共振散射信号并用RLS表示；测量RLS信号，用激发与发射光路的方向满足要求的专用光学检测设备，或用能测量同步荧光的荧光分光光度计；

RLS信号测量波长选择：用荧光分光光度计扫描300 nm到700 nm间蛋白样品同步荧光光谱；对RLS光谱中发射信号未出界的最高浓度样品、浓度降低10%以上的样品，将其发射光谱信号扣减溶剂RLS光谱得蛋白净RLS信号；选390到415nm间的任一波长，或此波长区间内蛋白样品净RLS信号最高的波长，作为蛋白RLS信号测定波长λ；

溶剂RLS信号测量：在所选测定波长λ下，对溶剂独立取样，重复测定溶剂RLS信号不少于5次，获得溶剂RLS信号均值mean、标准差SD；

响应曲线测定：测定每个蛋白样品RLS信号为Y_i；其中，Y_i下标i与样品编号对应即与该样品蛋白质浓度为C_i对应；用于分析的Y_i均在仪器能准确测量的信号强度范围内；

响应曲线初段数据分析：从最低浓度样品的Y_i开始，一直到对应样品所得Y_i减去mean后的差值刚好不小于SD的5倍或等于SD的5倍为止的数据，称为初段数据；用线性函数拟合初段数据获得预测模型，称为初段线性预测模型；

响应曲线中末段数据分析：从样品中蛋白浓度大于初段数据所覆盖的最大蛋白浓度且所得Y_i减去mean后的差值不低于超过SD的6倍开始，到所得Y_i减去mean后的差值随着样品中蛋白浓度增加而接近线性增加的上限为止的数据，称为中末段数据；用线性函数拟合中末段数据获得预测模型，称为中末段线性预测模型；

蛋白溶解度估算：延长初段线性预测模型和中末段线性预测模型，交点为溶解度。

2.据权利要求1所述一种测定蛋白溶解度的方法，其用于定性比较蛋白溶解度时，扫描该蛋白浓度在其溶解度上下30%时的RLS光谱，比较350 nm到450 nm间信号；在此波长范围内，相同浓度蛋白样品RLS信号越高则样品中蛋白溶解度越低或含有不溶颗粒。