[发明专利]一种固定化青霉素G酰化酶及其制备方法

权利要求书

1.一种固定化青霉素G酰化酶，其特征在于，所述固定化青霉素G酰化酶具有纳米囊性结构，其包括：

Fe₃O₄NPs固定化PGA，所述Fe₃O₄NPs的表面负载有PTA；以及

包覆在所述Fe₃O₄NPs固定化PGA表面的PDA涂层，其中PTA为聚单宁酸，PGA为青霉素G酰化酶，PDA为聚多巴胺。

2.一种固定化青霉素G酰化酶的制备方法，其特征在于，包括：

采用TA对Fe₃O₄NPs进行表面修饰，制备得Fe₃O₄@PTANPs；

将所述Fe₃O₄@PTANPs作为载体对PGA进行固定化，制备得Fe₃O₄@PTA-PGANPs；

采用DA对所述Fe₃O₄@PTA-PGANPs进行表面包覆，制备得Fe₃O₄@PTA-PGA/PDA，即为固定化青霉素G酰化酶，其中TA为单宁酸，DA为多巴胺。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，制备Fe₃O₄@PTANPs，包括：

将Fe₃O₄NPs分散在蒸馏水中，并在40℃的恒温水浴中通N₂30min；

向Fe₃O₄NPs的水分散液中加入TA水溶液，并在N₂保护下进行反应2h；

反应结束后对产物进行分离，并用蒸馏水洗涤分离出的产物，直至洗涤所述产物的洗涤液在275nm处的吸光度小于0.005，所述吸光度采用紫外分光光度法进行测定，即得Fe₃O₄@PTANPs。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，还包括：

在40℃的温度下，对制备的Fe₃O₄@PTANPs进行真空干燥至恒重。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，制备Fe₃O₄@PTA-PGA/PDA，包括：

将Fe₃O₄@PTA-PGANPs分散在PBS缓冲液中；

向Fe₃O₄@PTA-PGANPs/PBS溶液中加入DA，在25℃恒温水浴中，搅拌下进行聚合反应4-9h；

反应结束后，对产物进行分离，并用PBS缓冲液洗涤分离出的产物，直至洗涤所述产物的洗脱液在507nm处的吸光度小于0.005，所述吸光度采用紫外分光光度法进行测定，即得Fe₃O₄@PTA-PGA/PDA。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，还包括：

在40℃的温度下，对制备的Fe₃O₄@PTA-PGA/PDA进行真空干燥。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述PBS缓冲液的浓度为40mmol/mL，pH＝8.0。

8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，进行聚合反应的时间为4h。

9.根据权利要求1所述的固定化青霉素G酰化酶，其特征在于，所述Fe₃O₄NPs的平均粒径为9.13nm。