[发明专利]一种具有C5蛋白靶向性的硫酸软骨素寡糖的制备方法与应用

权利要求书

1.一种具有C5蛋白靶向性的硫酸软骨素寡糖的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

对硫酸软骨素进行酶解处理，对酶解产物进行分离，得到不同的寡糖组分；

使用溶血试验和促小鼠细胞增殖试验对各寡糖组分进行验证，对硫酸软骨素寡糖进行初步的考察与筛选；

所述溶血试验包括：取兔红细胞悬液，用Mg²⁺-EGTA 缓冲液将兔红细胞稀释；将不同浓度的CS寡糖溶液与NHS置于低温振摇孵育；反应结束后立即加入兔红细胞悬液，混匀，孵育；

所述促小鼠细胞增殖试验包括：提取原代小鼠软骨细胞，加入不同浓度的 CS 寡糖溶液，恒温培养，采用 CCK-8 试剂盒测定细胞数，计算促软骨细胞增殖率；

所述硫酸软骨素为鱿鱼来源的硫酸软骨素；

所述酶解处理具体采用硫酸软骨素ABC酶；具体为：配制80 mg/mL 的CS溶液，加硫酸软骨素ABC内切酶200 μL，18 h后，再补加酶150 μL，继续酶解8 h；

所述酶解产物分离方法采用过柱分离方式，所述酶解产物分离方法具体为：以1 mol/L氯化钠，10%乙醇为流动相，采用Bio-Gel P10柱对酶解产物进行分离，流速为2.0 mL/10min，将每10 min流出的组分收集为一管，检测波长为210 nm，合并相同的组分；离心浓缩，G25柱脱盐，冻干得到不同片段的寡糖组分；

所述硫酸软骨素寡糖为硫酸软骨素二糖。

2.如权利要求1所述的具有C5蛋白靶向性的硫酸软骨素寡糖的制备方法，其特征在于，所述方法还包括对寡糖组分进行表征，所述表征方法采用电喷雾质谱法，表征其相对分子质量。

3.一种硫酸软骨素寡糖，其特征在于，所述硫酸软骨素寡糖通过权利要求1或2所述制备方法获得，所述硫酸软骨素寡糖为硫酸软骨素二糖。

4.权利要求3所述硫酸软骨素寡糖在制备骨关节炎治疗药物中的应用。

5.如权利要求4所述应用，其特征在于，所述骨关节炎治疗药物具体为通过调节补体系统治疗骨关节炎的药物。