[发明专利]一种二氧化硅均孔膜用于血液中H2

说明书

本发明涉及一种二氧化硅均孔膜用于血液中H₂S的电化学发光检测方法。首先通过电化学辅助方法法制备二氧化硅均孔膜修饰电极，通过共价方法在二氧化硅均孔膜孔道中枝接叠氮基团；在H₂S存在下，二氧化硅均孔膜中的叠氮基团被还原为氨基基团，从而改变了二氧化硅均孔膜孔道的表面电荷，排斥带正电荷的三联吡啶钌和三丙胺分子进入二氧化硅均孔膜孔道，降低其电化学发光信号；基于三联吡啶钌的电化学发光信号绘制工作曲线；利用该方法检测血液样品中的H₂S。

技术领域

本发明涉及血液中H₂S的检测方法，具体的说一种二氧化硅均孔膜制备用于电化学发光检测H₂S。

背景技术

生命在新陈代谢活动中，需要各种活性物质参与信号传导与能量传递。其中，硫化氢（H₂S）分子在在生命活动中未一种神经调节因子，广泛参与生理活动。硫化氢浓度过高或过低都可以引起神经系统疾病。因此，发展高效检测硫化氢的检测方法十分必要。目前已用于测定硫化氢的方法主要有色谱法、荧光光谱法、电化学法等。色谱法可精确检测硫化氢，但这种方法收集的气体样品不稳定，而且对操作人员的要求比较高。荧光探针分子通常涉及复杂繁琐的合成和提纯步骤。对于复杂的生物样品，容易在电极表面吸附产生电极钝化，为了提高电化学测试结果的准确性，通常需要复杂的样品预处理过程。因此，建立一种高灵敏和便捷的检测硫化氢的方法，成为该领域亟需解决的问题之一。

二氧化硅均孔膜是一种孔径在2-50 nm范围且尺寸均一的一种薄膜，可通过电化学辅助、Stöber溶液生长及油诱导自组装等方法在固体表面生长。本文中所制备二氧化硅均孔膜的孔径为~2.3 nm，可分离生物样品中的大分子，避免生物分子对电极产生钝化，可提高检测的准确性和灵敏度；通过在二氧化硅均孔膜表面共价接枝与硫化氢具有特异性反应的叠氮基团，提高对硫化氢检测的选择性。此外，电化学发光是化学发光和电化学发光相结合的一种技术，具有灵敏度高、反应可控、无背景干扰等优点。将电化学发光方法和二氧化硅均孔膜修饰电极相结合，可构建高灵敏度、高选择性和准确性的硫化氢传感器。

发明内容

本发明的目的在于建立一种二氧化硅均孔膜用于H₂S的电化学发光检测方法。

所述的一种二氧化硅均孔膜用于H₂S的电化学发光检测方法过程如下：

（1）制备二氧化硅均孔膜修饰的工作电极；

（2）制备叠氮基团共价接枝二氧化硅均孔膜修饰的工作电极；

（3）将（2）制得的电极浸入不同浓度的S^2-标准溶液中反应一定时间；

（4）将（3）制得电极置于含发光分子和共反应剂的缓冲溶液中，测其电化学发光信号，根据不同浓度S^2-标准溶液处理后电极的电化学发光信号构建标准曲线；

（5）将（3）制备的电极浸入到血清样品中，反应一段时间，冲洗电极，测量电极在发光分子和共反应剂溶液中的电化学发光信号，检测血样中H₂S。

所述的一种二氧化硅均孔膜用于检测血液内H₂S的电化学检测方法具体步骤如下：

（1）二氧化硅均孔膜修饰电极的制备：首先将氧化铟锡（ITO）玻璃电极置于NaOH、丙酮、乙醇、去离子水中各超声30 min处理，吹干备用。将1.58 g十六烷基溴化铵（CTAB）、3.3 g正硅酸乙酯溶解于20 mL pH 2.7硝酸钠和20 mL无水乙醇中，室温搅拌3.0 h得到澄清溶液；将ITO电极浸入到上述溶液中，-1.3 V下反应7 s后用水冲洗电极，随后置于100^oC烘箱中烘干过夜；在含有0.1 M盐酸的乙醇溶液中搅拌15 min将二氧化硅孔道中的CTAB分子除去；即可得到二氧化硅均孔膜修饰电极。