[发明专利]提高大肠杆菌重组蛋白胞外分泌水平的方法有效
申请号: | 202010455589.X | 申请日: | 2020-05-26 |
公开(公告)号: | CN111826389B | 公开(公告)日: | 2022-05-13 |
发明(设计)人: | 陈献忠;杨海泉;王浩坤;张坤杰;王拂祥;沈微;夏媛媛 | 申请(专利权)人: | 江南大学 |
主分类号: | C12N15/70 | 分类号: | C12N15/70;C12N15/57;C12N1/21;C12N9/04;C12N9/08;C12N9/10;C12N9/16;C12N9/26;C12N9/48;C07K14/78;C07K14/435;C12P21/02;C12R1/19 |
代理公司: | 苏州市中南伟业知识产权代理事务所(普通合伙) 32257 | 代理人: | 苏张林 |
地址: | 214122 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 提高 大肠杆菌 重组 蛋白 外分泌 水平 方法 | ||
1.一种提高大肠杆菌重组蛋白胞外分泌水平的方法,其特征在于,通过同源重组的方法将包含1-4个SD序列的基因片段整合至编码D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶DacA的启动子与DacA编码基因之间;
编码所述SD序列的核苷酸序列如SEQ ID No .1所示;
距离DacA初始密码子ATG最近的SD序列与初始密码子ATG序列的距离为0-10bp。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述大肠杆菌是E. coliBL 21、E.coliJM109、E.coli DH5α、E.coli Rosetta、E.coli TOP10、E.coli M110或E.coli S110。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)设计并合成含有抗性基因及待整合基因上下游同源臂的整合框;所述待整合基因包括编码D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶DacA的启动子,所述上下游同源臂中包括1-4个SD序列;
(2)将所述整合框电转化至含有质粒载体的大肠杆菌感受态细胞,同源重组后筛选出基因整合的大肠杆菌,并消除抗性基因。
4.一种重组大肠杆菌,其特征在于,所述重组大肠杆菌中,编码D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶DacA的启动子和DacA编码基因之间整合有1-4个SD序列;
编码所述SD序列的核苷酸序列如SEQ ID No .1所示;
距离DacA初始密码子ATG最近的SD序列与初始密码子ATG的距离为0-10bp。
5.权利要求4所述的重组大肠杆菌在重组蛋白胞外生产中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于:所述重组蛋白包括淀粉酶、绿色荧光蛋、胶原蛋白、果糖基转移酶、甲基对硫磷水解酶、过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶中的一种或几种。
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