[发明专利]提高大肠杆菌重组蛋白胞外分泌水平的方法有效

专利信息
申请号: 202010455589.X 申请日: 2020-05-26
公开(公告)号: CN111826389B 公开(公告)日: 2022-05-13
发明(设计)人: 陈献忠;杨海泉;王浩坤;张坤杰;王拂祥;沈微;夏媛媛 申请(专利权)人: 江南大学
主分类号: C12N15/70 分类号: C12N15/70;C12N15/57;C12N1/21;C12N9/04;C12N9/08;C12N9/10;C12N9/16;C12N9/26;C12N9/48;C07K14/78;C07K14/435;C12P21/02;C12R1/19
代理公司: 苏州市中南伟业知识产权代理事务所(普通合伙) 32257 代理人: 苏张林
地址: 214122 江*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 提高 大肠杆菌 重组 蛋白 外分泌 水平 方法
【权利要求书】:

1.一种提高大肠杆菌重组蛋白胞外分泌水平的方法,其特征在于,通过同源重组的方法将包含1-4个SD序列的基因片段整合至编码D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶DacA的启动子与DacA编码基因之间;

编码所述SD序列的核苷酸序列如SEQ ID No .1所示;

距离DacA初始密码子ATG最近的SD序列与初始密码子ATG序列的距离为0-10bp。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述大肠杆菌是E. coliBL 21、E.coliJM109、E.coli DH5α、E.coli Rosetta、E.coli TOP10、E.coli M110或E.coli S110。

3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)设计并合成含有抗性基因及待整合基因上下游同源臂的整合框;所述待整合基因包括编码D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶DacA的启动子,所述上下游同源臂中包括1-4个SD序列;

(2)将所述整合框电转化至含有质粒载体的大肠杆菌感受态细胞,同源重组后筛选出基因整合的大肠杆菌,并消除抗性基因。

4.一种重组大肠杆菌,其特征在于,所述重组大肠杆菌中,编码D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶DacA的启动子和DacA编码基因之间整合有1-4个SD序列;

编码所述SD序列的核苷酸序列如SEQ ID No .1所示;

距离DacA初始密码子ATG最近的SD序列与初始密码子ATG的距离为0-10bp。

5.权利要求4所述的重组大肠杆菌在重组蛋白胞外生产中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于:所述重组蛋白包括淀粉酶、绿色荧光蛋、胶原蛋白、果糖基转移酶、甲基对硫磷水解酶、过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶中的一种或几种。

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