[发明专利]靶向于CD19的嵌合抗原受体及其应用

说明书

本发明公开了一种靶向于CD19的嵌合抗原受体及其应用，包括细胞外识别域和细胞内信号转导结构域，其中，细胞外识别域依次包括信号肽、抗原识别区、铰链区和跨膜区，所述抗原识别区为CD19单链抗体，所述CD19单链抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变去与所述轻链可变区之间通过连接肽连接。本发明的抗CD19蛋白的抗体，亲和力显著提高；基于抗CD19抗体改造成的嵌合抗原受体T细胞可以增强对表达CD19肿瘤细胞的杀伤能力。

技术领域

本发明涉及技术领域，具体涉及一种靶向于CD19的嵌合抗原受体及其应用。

背景技术

嵌合性抗原受体Chimeric antigen receptor(CAR)技术是利用基因工程方法，赋予T细胞具有识别肿瘤细胞表面抗原的能力，并特异性识别和杀伤肿瘤细胞，没有HLA(人类白细胞抗原)的限制。CAR的结构由细胞外识别域和细胞内信号转导结构域组成：细胞外识别域可以特异性地识别肿瘤表面特异性蛋白(抗原)，细胞内信号转导结构域用来启动T淋巴细胞识别肿瘤细胞(靶细胞)表面蛋白后的免疫应答，发挥细胞毒作用，杀伤靶细胞。

CAR的细胞外识别域由信号肽(Signal peptide，SP)、识别抗原的单链抗体结构域(scFv)的胞外区、连接区(Linker)、铰链区(Hinge)，以及跨膜区(transmembrane,TM)组成；细胞内信号转导结构域由共刺激分子和CD35(CD32)胞内段组成。无共刺激分子为第一代CAR，含有1个共刺激分子(CD28.4-1BB.O×40,1ICOoS等)为第二代CAR，含有2个共刺激分子为第三代CAR。亟需研发一种新的靶向于CD19的嵌合抗原受体。

发明内容

为此，本发明提供一种靶向于CD19的嵌合抗原受体及其应用。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供一种靶向于CD19的嵌合抗原受体，包括细胞外识别域和细胞内信号转导结构域，其中，细胞外识别域依次包括信号肽、抗原识别区、铰链区和跨膜区，所述抗原识别区为CD19单链抗体，所述CD19单链抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变去与所述轻链可变区之间通过连接肽连接。

本发明的一个实施例中，所述CD19单链抗体重链可变区为如下a或b或c：

其由SEQ ID NO.1中第第1-120所示的氨基酸残基组成；

将a)所限定的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失/或添加且具有相同功能的肽链；

与a)所限定的氨基酸序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且具有相同功能的肽链；

和/或，

所述连接肽的氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示氨基酸序列中第121-135位。

本发明的一个实施例中，所述信号肽为CD8信号肽；

所述跨膜区选自CD28、CD3ζ、CD4、CD8和CD2中的一种或多种跨膜结构；

所胞内信号结构域包括胞内共激分子和信号结构域；

所述信号结构域选自CD3ζ、CD5、CD28和CD124中的一种或多种。

本发明还提供编码所述的靶向于CD19的嵌合抗原受体的核酸分子，或，含有所述核酸分子的重组载体、表达盒、重组菌、重组病毒或细胞。

本发明的一个实施例中，所述重组载体为将所述核酸分子导入慢病毒载体中，得到表达上述所述的嵌合抗原受体的慢病毒载体；所述重组病毒为将所述重组载体导入宿主细胞，包装得到重组病毒；和/或，所述细胞为将所述重组载体通过所述慢病毒转染到T细胞中，得到表达所述嵌合抗原受体的T细胞。