[发明专利]一种菜籽硫代葡萄糖苷的提取检测方法

说明书

本发明公开了一种菜籽硫代葡萄糖苷的提取检测方法，属于油料作物深加工领域。本发明通过恒温水浴、超声提取、固相萃取柱及微孔滤膜等技术的综合应用对菜籽中硫代葡萄糖苷的提取纯化方法进行了改进，并利用离子对提取法建立了一种准确、高效的菜籽硫代葡萄糖苷分析方法，该方法不仅可以满足已知的14种菜籽硫代葡萄糖苷的检测需要，还首次对新发现的6种存在于菜籽中的硫代葡萄糖苷成分进行了提取和定性表征。本发明解决了传统菜籽硫代葡萄糖苷作为风味前体物质降解机理不清的问题，改善了菜籽硫代葡萄糖苷在提取工艺中的稳定性，在菜籽油加工的原料选择和育种方向等领域具有极大的应用潜力和经济价值。

技术领域

本发明属于油料作物深加工领域，尤其涉及一种菜籽硫代葡萄糖苷的提取检测方法。

背景技术

菜籽油因为风味独特而深受消费者喜爱，其感官风味特征显著区别于其他植物油。硫代葡萄糖苷(glucosinolate,GS)是菜籽中标志性的次生代谢产物，根据侧链基团的不同，可以把硫代葡萄糖苷分为脂肪族、芳香族和吲哚族三大类。在芥子酶的催化作用或者加热条件下硫代葡萄糖苷会发生降解(即酶降解和热降解)，降解产物有异硫氰酸酯、硫氰酸酯、腈类、硫氰酸酯等，其中部分有辛辣气味的特征风味物质，次级重排反应还能导致其他风味化合物的形成。硫代葡萄糖苷降解产物种类和含量决定了菜籽油风味的气味特征，因此对菜籽原料中硫代葡萄糖苷的提取和鉴定至关重要，有利于菜籽油加工的原料选择和育种方向的指导。

目前油菜籽中常见报道的硫代葡萄糖苷有14种，通过农业行业标准方法测定的硫代葡萄糖苷包括2-羟基-3-丁烯基硫代葡萄糖苷，反式-2-羟基-3-丁烯基硫代葡萄糖苷，丙烯基硫代葡萄糖苷，4-甲亚砜丁基硫代葡萄糖苷，2-羟基-4-戊烯基硫代葡萄糖苷，5-甲亚砜戊基硫代葡萄糖苷，3-丁烯基硫代葡萄糖苷，4-羟基-3-吲哚甲基硫代葡萄糖苷，4-戊烯基硫代葡萄糖苷，苯甲基(苄基)硫代葡萄糖苷，3-吲哚甲基硫代葡萄糖苷，苯乙基硫代葡萄糖苷，4-甲氧基3-吲哚甲基硫代葡萄糖苷和1-甲氧基-3-吲哚甲基硫代葡萄糖苷。

但是，由于部分标准品的缺失，以往对菜籽硫代葡萄糖苷的定性分析不够准确，未知峰无法鉴别。而目前通过菜籽油挥发性成分的鉴定发现菜籽中可能还存在其他未鉴定的硫代葡萄糖苷结构。

因此，开发一种可以保留更多种类菜籽硫代葡萄糖苷、避免敏感物质降解的提取方法以及快捷高效准确的检测方法就成为了本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是针对现有技术中存在的问题，提供一种通过恒温水浴、超声及微柱系统的菜籽硫代葡萄糖苷的提取纯化方法，并利用离子对提取法建立一种准确、高效的菜籽硫代葡萄糖苷的定性分析方法。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种菜籽硫代葡萄糖苷的提取检测方法，所述菜籽硫代葡萄糖苷包括5-甲硫戊基硫苷、4-(甲基亚磺酰基)丁基硫苷、4-甲硫丁基硫苷、苯基乙基硫硫苷、3-(甲基磺酰基)丙基硫苷、白介子硫苷、3-甲硫丙基硫苷、7-(甲硫基)庚基硫苷中的一种或多种；且

所述提取检测方法的步骤包括：

步骤I、原料预处理，将菜籽样品在-80℃冷冻保持24-48h后，研磨过筛，得到菜籽粉末样品；

步骤II、硫代葡萄糖苷的提取，将步骤I得到的菜籽粉末样品溶于70％甲醇水溶液中，再将混合液在75℃下水浴20～40min，离心收集上清液，得到菜籽提取液；

步骤III、硫代葡萄糖苷的纯化，利用固相萃取柱和微孔过滤膜对步骤II得到的菜籽提取液进行纯化过滤，得到进样试液；

步骤IV、利用液相色谱-质谱联用仪对步骤III得到的进样试液进行检测。