[发明专利]一种检测Y染色体微缺失和性染色体数目的引物组合物及应用

权利要求书

1.一种检测Y染色体微缺失和性染色体数目的引物组合物，其特征在于：所述引物包含以下：

（1）Y染色体长臂AZF区域的专一性引物，针对以下序列标记位点进行扩增：sY84、sY86、sY127、sY134、sY254、sY255、sY82、sY1064、sY1065、sY88、sY105、sY121、sY1192、sY153和sY160，以上所述各位点上游引物5’端与下游引物5’端包含不同非人源性基因组序列；

（2）性染色体专一性引物，针对以下性染色体检测位点进行扩增：Amelogenins、TAF9L、ZFX/Y、SRY、DXY267、DX9898、DX6789和HPRT，以上所述各位点上游引物5’端与下游引物5’端包含不同非人源性基因组序列；

（3）包含与各检测位点上游引物5’端相同的非人源性基因组引物SEQ ID NO.1、下游引物5’端相同的非人源性基因组引物SEQ ID NO.2，其中所述非人源性基因组引物包含至少两种以上的非人源基因组序列；

至少一种非人源性基因组引物包含荧光修饰；

所述引物具体包含以下：

第一引物P1：

TCGACGCACGCTCCTGCTACA GGGTCGGTGCACCTAAATAA，

第二引物P2：

TCGACGCACGCTCCTGCTACA TGCACTAAAGAGTGATAATAAATTCTG，

第三引物P3：

TCGACGCACGCTCCTGCTACA TTGTAATCCAAATACATGGGC，

第四引物P4：

TCGACGCACGCTCCTGCTACA CACCCAGCCATTTGTTTTAC，

第五引物P5：

TCGACGCACGCTCCTGCTACA GCATCCTCATTTTATGTCCAAC，

第六引物P6：

TCGACGCACGCTCCTGCTACA CAACCCAAAAGCACTGAGTA，

第七引物P7：

TCGACGCACGCTCCTGCTACA GTCTGCCTCACCATAAAACG，

第八引物P8：

TCGACGCACGCTCCTGCTACA ACCACTGCCAAAACTTTCAA，

第九引物P9：

TCGACGCACGCTCCTGCTACA GTGACACACAGACTATGCTTC，

第十引物P10：

TCGACGCACGCTCCTGCTACA ACACACAGAGGGACAACCCT，

第十一引物P11：

TCGACGCACGCTCCTGCTACA GGGTGTTACCAGAAGGCAAA，

第十二引物P12：

TCGACGCACGCTCCTGCTACA GAACCGTATCTACCAAAGCAGC，

第十三引物P13：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC GTTACAGGATTCGGCGTGAT，

第十四引物P14：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC CTCGTCATGTGCAGCCAC，

第十五引物P15：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC AGTTCACAGAATGGAGCCTG，

第十六引物P16：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC CCTGTGACTCCAGTTTGGTC，

第十七引物P17：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC TACGGGTCTCGAATGGAATA，

第十八引物P18：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC TCATTGCATTCCTTTCCATT，

第十九引物P19：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC TCAGGTACTGTGATGCCGTT，

第二十引物P20：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC TGAAGAGGACACAAAGGGAAA，

第二十一引物P21：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC ACTACCATTTCTGGAAGCCG，

第二十二引物P22：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC CTCCCTTGGTTCATGCCATT，

第二十三引物P23：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC ATCCTGCCCTTCTGAATCTC，

第二十四引物P24：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC CAGTGTCCACTGATGGATGA，

第二十五引物P25：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC GGCTCACAAACGAAAAGAAA，

第二十六引物P26：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC CTGCAGGCAGTAATAAGGGA，

第二十七引物P27：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC AAGGGCTTCTTCTCTTGCTT，

第二十八引物P28：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC AGGGAGCTTAAACTCACCGT，

第二十九引物P29：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC AGAAGGGTCCTGAAAGCAGGT，

第三十引物P30：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC GCCTACTACCTGGAGGCTTC，

第三十一引物P31：

TCGACGCACGCTCCTGCTACA GAATATTCCCGCTCTCCGGA，

第三十二引物P32：

TCGACGCACGCTCCTGCTACA GCTGGTGCTCCATTCTTGAG，

第三十三引物P33：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC ACCRCTGTACTGACTGTGATTACAC，

第三十四引物P34：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC GCCYTCTTTGGTATCYGAGAAAGT，

第三十五引物P35：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC CCCTGGGCTCTGTAAAGAATAGTG，

第三十六引物P36：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC ATCAGAGCTTAAACTGGGAAGCTG，

第三十七引物P37：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC GCATCCTCATTTTATGTCCA，

第三十八引物P38：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC CAACCCAAAAGCACTGAGTA，

第三十九引物P39：

TCGACGCACGCTCCTGCTACA GTGGTCTTCTACTTGTGTCAATAC，

第四十引物P40：

TCGACGCACGCTCCTGCTACA CTAAATAAAGTCATATCAGCTGC，

第四十一引物P41：

TCGACGCACGCTCCTGCTACA ACCTCGTGATCATGTAAGTTGG，

第四十二引物P42：

TCGACGCACGCTCCTGCTACA CTTCATTATGTGCTGGGGTAAA，

第四十三引物P43：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC TCATGTAAGAGGGCAGTAGCTT，

第四十四引物P44：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC ATGCCACAGATAATACACATCCCC，

第四十五引物P45：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC CGAGCACACCTACAAAAGCTG，

第四十六引物P46：

TGACCGTCTGCGCCTCGTTC GCTTCTTAGGCTCACCTCACTGAGCA，

第四十七引物SEQ ID NO.1：TCGACGCACGCTCCTGCTACA，

第四十八引物SEQ ID NO.2：TGACCGTCTGCGCCTCGTTC，

其中画单线部分为非人源性基因组序列，引物5’端带有VIC荧光修饰，粗体部分为非人源性基因组序列，引物5’端带有FAM荧光修饰。

2.一种包含权利要求1所述引物组合物的检测Y染色体微缺失和性染色体数目的检测试剂盒，其特征在于，其组成成分包括Y-del反应液、Y-del引物混合液、DNA热启动聚合酶、Y-del正常男性对照、Y-del正常女性对照、Y-del空白对照；

所述Y-del引物混合液中包含权利要求1中所述的引物组合物；

所述Y-del反应液中包含增强剂，所述增强剂包括甜菜碱、二甲基亚砜、甘油、牛血清白蛋白或乙二醇中的一种或多种；

所述Y-del正常男性对照包含所有Y染色体长臂上AZF区域检测位点基因质粒、性染色体数目检测位点基因质粒；

所述检测试剂盒的PCR扩增反应的循环数为26-34循环。