[发明专利]一种检测新型冠状病毒COVID-19的核酸组合物及应用

说明书

本发明公开了一种检测新型冠状病毒COVID‑19的核酸组合物及应用，先基于转录介导的扩增技术（TMA）进行核酸样本扩大，再联合CRISPR‑Cas13a蛋白酶的“连带切割”的活性进行特异性地检测扩大后的病毒靶标核酸。向含有待检靶标核酸的反应体系中加入sgRNA、Cas13a蛋白、ssRNA信号报告探针和反应缓冲液，反应进行时对其信号读取检测，进而得以检测目的基因。使用本发明的方法可快速检测样品中是否含有靶标核酸序列，且与转录介导的核酸扩增技术的结合，使得该检测方法的灵敏度可以达到纳摩尔级，可适用于快速检测病原微生物、基因突变和特异靶标RNA等。

技术领域

本发明属于分子生物技术领域，具体涉及一种检测新型冠状病毒COVID-19的核酸组合物及应用。

背景技术

新型冠状病毒COVID-19自爆发以来，疫情的迅速蔓延，无不牵动着国人的心，也给全国疫情防控承受空前压力，绝大部分省市都进入公共卫生事件一级响应状态。目前，已知的人冠状病毒共有7种，分别是在1965年发现的HCoV-229E，在1967年鉴定出的HCoV-OC43，在2003年在我国广东出现的SARS-CoV，在2004年在荷兰分离鉴定出HCoV-NL63，在2005年在香港筛查出HCoV-HKU1，在2012年在中东地区出现的MERS-CoV，以及在2019年中国武汉发现的新型冠状病毒COVID-19。其中，新型冠状病毒COVID-19是在2019年12月末在湖北省武汉市爆发的一种引起人类呼吸道疾病和严重肺炎等临床症状的可人传人的传染病。截止2020年2月13日，全国已确诊59885人感染该病，疑似病例16067人，导致1368人死亡。国际病毒分类委员会（ICTV）声明，将该新型冠状病毒命名为“SARS-Cov2”(Severe Acute RespiratorySyndrome Coronavirus 2)。最新更名为“COVID-19”。冠状病毒是外面包裹着脂肪膜，其膜表面含有刺突糖蛋白、小包膜糖蛋白、膜糖蛋白三种糖蛋白。其内部核酸为长27-31kb的单链RNA，具有正链RNA特有的重要结构特征：即RNA链5’端有甲基化“帽子”构造，3’端有PolyA“尾巴”结构，可以发挥翻译模板作用，而省去了RNA－DNA－RNA的转录过程。也就是说，一般这类病毒颗粒中的遗传物质正链RNA进入寄主细胞，就直接作为mRNA，翻译出所编码的蛋白质，其中包括衣壳蛋白和病毒的RNA聚合酶。在病毒RNA复制酶作用下复制RNA，同时以该RNA为模板合成dsRNA，在不断重复复制和解旋的过程中自我装配成成熟的病毒。

其中，核酸检测是目前最可靠的筛查和确认辅助手段，在符合疑似病例标准的基础上，痰液、咽拭子、下呼吸道分泌物等标本核酸阳性确诊。由于目前世界上还没有研发出有效的针对该病毒的疫苗，为防止疾病传播疫点内和涉及人员的人员只能被全部隔离，给生产生活各个方面都带来巨大损失。因此，在当前严峻的防控形势下全国亟需要开发一种简便、快速且高灵敏度的鉴别诊断试剂盒，为临床快速确诊新型冠状病毒COVID-19以及其他类似RNA病毒感染提供检测技术。

特异性核酸或基因分子检测方法是当代医学发展的重要前沿领域之一，具有的应用价值，如病原体检测、遗传病检测等。通过探究每种病原微生物其独一无二的特征核酸分子序列的存在或变化，从而对人体状态与疾病做出诊断的方法，也叫核酸诊断(NADs ,nucleic acid diagnostics)。其广泛用于食品安全、环境微生物污染检测，人体病原菌感染诊断等领域。