[发明专利]一种基于还原氧化石墨烯猝灭鲁米诺@金纳米粒子的化学发光传感器的制备方法

权利要求书

1.一种基于还原氧化石墨烯猝灭鲁米诺@金纳米粒子的化学发光传感器的制备方法，其特征在于，该方法具有以下工艺步骤：

（1）还原氧化石墨烯的制备：还原氧化石墨烯采用多巴胺还原氧化石墨烯的方法获得，称取0.05 ~ 0.1 g氧化石墨烯放入250 mL烧杯中，并向其中加入50 ~ 100 mL超纯水，超声2 ~ 4 h；接着向烧杯中加入0.2 ~ 0.4 g多巴胺，继续超声2 ~ 4 h；将烧杯转移至80 ~ 90ºC油浴锅中反应2 ~ 4 h；得到的产物用超纯水洗涤三次，最后在8000 r/min条件下离心分离，将分离后的沉淀放入50 ~ 60ºC真空干燥箱中烘干；

（2）还原氧化石墨烯/腺苷适配体的制备：称取0.01 ~ 0.05 g上述（1）中制备的还原氧化石墨烯，将其均匀分散于30 ~ 50 mL超纯水中；向该分散液中加入0.01 ~ 0.03 g 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺和0.01 ~ 0.03 g N-羟基琥珀酰亚胺；将0.01 ~0.02 μmol腺苷适配体加入上述分散液中，室温下孵化2 ~ 4 h；在8000 r/min条件下离心分离8 ~ 10 min，将分离后的沉淀放入50 ~ 60ºC真空干燥箱中烘干；

（3）鲁米诺@金纳米粒子的制备：移取2 ~ 4 mL 0.05 mol/L的氯金酸溶液于250 mL锥形瓶中，加入超纯水稀释至100 mL，加热至沸腾；在强烈搅拌下，迅速加入0.05 mol/L的鲁米诺标准储备溶液1 ~ 3 mL，继续加热直至溶液转为酒红色；停止加热后，使溶液冷却至室温，得到鲁米诺@金纳米粒溶液，将其置于4ºC冰箱中保存备用；

（4）鲁米诺@金纳米粒子/互补链DNA的制备：称取2 ~ 5 mL上述（3）中制备的鲁米诺@金纳米粒子溶液于10 mL离心管中，并向试管中加入0.02 ~ 0.05 μmol的互补链DNA，室温下孵化2 ~ 4 h；在8000 r/min条件下离心分离8 ~ 10 min，将分离后的沉淀重新溶解于25mL pH为7.0 ~ 7.4的磷酸盐缓冲液中；

（5）鲁米诺@金纳米粒子/互补链DNA-腺苷适配体/还原氧化石墨烯的制备：移取2 ~ 5mL 0.01 mol/L的上述（2）中制备的还原氧化石墨烯/腺苷适配体分散液于15 mL离心管中，并向试管中加入2 ~ 5 mL上述（4）中制备的鲁米诺@金纳米粒子/互补链DNA溶液，室温下孵化2 ~ 4 h；在8000 r/min条件下离心分离8 ~ 10 min，将分离后的沉淀重新分散到50 mLpH为7.0 ~ 7.4的磷酸盐缓冲液中；

（6）化学发光传感器的制备：在25 mL比色管中加入2 ~ 5 mL上述（5）中制备的鲁米诺@金纳米粒子/互补链DNA-腺苷适配体/还原氧化石墨烯分散液，当没有腺苷分子存在时，由于还原氧化石墨烯可以猝灭鲁米诺@金纳米粒子的化学发光，所以没有化学发光现象发生；移取1 ~ 2 mL腺苷待测液加入到该比色管中，腺苷分子和腺苷适配体因为特异性识别而结合在一起，使得鲁米诺@金纳米粒子脱离还原氧化石墨烯，所以还原氧化石墨烯对鲁米诺@金纳米粒子的猝灭作用消失，化学发光得到恢复，实现了对腺苷分子的定量检测。

2.根据权利要求1所述的一种基于还原氧化石墨烯猝灭鲁米诺@金纳米粒子的化学发光传感器的制备方法，其特征是：步骤（1）中所述的氧化石墨烯为厚度小于5 nm的单层氧化石墨烯。

3.根据权利要求1所述的一种基于还原氧化石墨烯猝灭鲁米诺@金纳米粒子的化学发光传感器的制备方法，其特征是：步骤（3）中所述的金纳米粒子采用柠檬酸钠还原氯金酸的方法制备得到，粒径小于10 nm。

4.根据权利要求1所述的一种基于还原氧化石墨烯猝灭鲁米诺@金纳米粒子的化学发光传感器的制备方法，其特征是：通过改变适配体的种类，可以实现不同待测物分子的检测。