[发明专利]巴弗洛霉素A1在体外诱导白血病细胞逆编程成为造血干祖细胞中的应用

说明书

本发明公开了巴弗洛霉素A1在体外诱导白血病细胞逆编程成为造血干祖细胞中的应用，并且该巴弗洛霉素A1有望应用于制备治疗急性B淋巴白血病的药物中。使没有完全分化的白血病细胞正向分化为成熟血细胞的诱导分化策略已成功地应用于儿童早幼粒白血病治疗。本发明首次采用天然化合物巴弗洛霉素A1诱导白血病细胞逆编程为造血干祖细胞，这是一项不同于以往思路、反其道而行之的原创性探索。这对于制备治疗急性B淋巴白血病的药物，探索白血病治疗新路径，具有重要意义。未来有可能通过此途径，拓展并优化白血病的临床疗法，优化后的免疫治疗方案则有望在未来降低治疗风险，提高治愈率。

技术领域

本发明属于医学领域，涉及一种巴弗洛霉素A1的新应用，具体涉及巴弗洛霉素A1在体外诱导白血病细胞逆编程成为造血干祖细胞中的应用。

背景技术

急性B淋巴细胞白血病(B-cellAcute Lymphoblastic Leukemia， B-ALL)是指前体或者成熟B淋巴细胞发生克隆性异常增殖所致的恶性疾病。B-ALL对化疗药物敏感，但化疗药物同时也杀死正常功能血细胞，极易发生粒细胞缺乏而导致重症感染，同时降低患者的免疫能力，使感染进一步加重，继而危及生命。造血干细胞移植是目前治疗白血病的最有效手段，但缺乏合适供体、预处理方案的毒副反应等因素限制了造血干细胞移植在大多数患者治疗中的应用，而且移植物抗宿主病(GVHD)、移植后复发、感染等因素也极大的影响了移植后患者的长期生存。

近年来，临床试验结果证明通过靶向CD19，CD20或CD30的 CAR-T细胞对B-ALL是有疗效的，CAR-T细胞治疗B-ALL也取得重大突破。尽管CAR-T细胞治疗为部分晚期肿瘤患者带来治愈的希望，但CAR-T在治疗过程中也存在明显的副作用：①既攻击异常的B细胞，也攻击正常的B细胞，可能导致B细胞不能正常产生抗体而发生感染致死，也可能引起细胞因子异常释放和严重过敏反应而死亡；②而基于抑制免疫检控点的免疫疗法因可诱发过度免疫反应或自身免疫反应也具有严重的治疗风险。当然，不断优化的免疫治疗方案有望在未来降低治疗风险。

2006年，Yamanaka等研究者使用与调控胚胎干细胞多能性密切相关的Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc四种转录因子，成功将小鼠胚胎成纤维细胞和成体成纤维细胞诱导为多潜能干细胞，并称其为诱导性多潜能干细胞(induced pluripotent stem cell，iPSC)。诱导性多能干细胞避免了伦理问题和免疫排斥问题，这一发现为肿瘤逆编程疗法的尝试提供了启示。2007年，Jaenisch实验室将iPSC技术应用于镰刀型贫血的小鼠模型的治疗上，提出用iPSC治疗单基因遗传疾病。2009年，高绍荣课题组将这一策略应用于地中海贫血症患者来源的细胞，获得病人特异的功能恢复的造血细胞。在白血病逆分化方面，Carette等(2010)、Kumano等(2012)、程涛课题组(2014)在白血病细胞中尝试通过导入Yamanaka四个转录因子获得iPSC，但这些iPSC会诱发白血病。这些研究对于白血病治疗是一项重要的探索，但也提示，用Yamanaka四个转录因子可能无法使白血病细胞逆编程为正常的造血干细胞。

iPSC技术一直受困于逆编程方法的安全隐患和低效率两大难题，不能真正用于临床治疗。目前使用最为广泛的通过病毒载体将因子(Oct4，Sox2，Klf4，c-Myc)随机整合入体细胞基因组获得iPSC 的方法仍存在缺陷。逆转录病毒与转录因子本身都存在风险，尤其是c-Myc，在约70％的人类肿瘤细胞中都可检测到其表达，故在应用中存在肿瘤发生的可能。Nakagawa等研究表明，使用包括c-Myc 在内的四种因子诱导MEF细胞时，得到的嵌合体小鼠有15％会出现肿瘤。