[发明专利]SARS-COV冠状病毒S2蛋白多肽及其应用

说明书

本申请涉及SARS‑COV冠状病毒S2蛋白多肽及其应用。具体而言，发现了一段特定的SEQ ID No.1所示的S2蛋白抗原表位，通过这一表位制备抗血清，显示所获得的抗体具有较好的效价，对SARS‑CoV攻击具有免疫保护作用。

技术领域

本申请涉及生物学领域。具体而言，涉及一种抗原表位，及其在作为疫苗中的用途。

背景技术

SARS-CoV为一种有包膜的单股正链RNA病毒，基因组长度约为29725核苷酸[1]。冠状病毒为最大的RNA病毒，病毒颗粒直径约为100nm。

按国际病毒分类委员会分类原则，冠状病毒科(Coronaviridae)归属于核糖病毒域(Riboviria)套式病毒目(Nidovirales)[2]。冠状病毒科下面又分为四个属(Genus)，分别称为：α冠状病毒、β冠状病毒、γ冠状病毒和δ冠状病毒。目前包括SARS-CoV-2在内共有7个已知人冠状病毒，它们来自α冠状病毒(HCoV-NL63，HCoV-229E)及β冠状病毒(HCoV-OC43，HCoV-HKU1，SARS-CoV，SARS-CoV-2和MERS-CoV)。其中SARS-CoV和SARS-CoV-2相关性最高且同属于萨克β冠状病毒(Sarbecovirus)亚属(subgenus)[2]。

SARS-CoV(GenBank:AY278488.2)基因组结构5'端有帽子结构，3'端有多聚腺苷酸poly(A)尾。从5'至3'依次为：ORF1a、ORF1b、S、PUP1、PUP2、E、M、PUP3、PUP4、PUP5及N等11个开放阅读框[3]。前2/3基因组内存在两个大的阅读框ORF1a和ORF1b，可编码两个复制酶相关的多蛋白前体pp1a和pp1ab。冠状病毒需要5'端错位一个核苷酸(-1)合成1b，最终翻译成完整的多蛋白前体pp1ab[4]。研究显示，冠状病毒感染细胞后会在胞质形成200-350nm大小的双层膜泡状细胞器样结构，是病毒重要的转录与复制场所。

刺突蛋白(即S蛋白)是病毒与靶细胞相互作用的重要胞膜蛋白，可介导病毒对宿主细胞的侵入过程。S蛋白可分为S1和S2两个部分。S1含有一个受体结合域(RBD)，可与细胞表面SARS-CoV受体血管紧张素转换酶2(ACE2)结合[5]；而S2部分有两个七肽重复序列HR1和HR2，参与病毒与细胞膜的融合[6]。

本领域仍需要开发一种SARS-CoV的疫苗，使其产生较好的抗体效价及对SARS-CoV攻击具有免疫保护作用。

发明内容

因此，根据本申请的一些实施方案，提供了多肽、肽片段、偶联物、免疫肽、免疫组合物、核酸片段、表达盒、核酸构建体、重组病毒、病毒性疫苗、肽疫苗、微生物疫苗、DNA疫苗、抗体、药用组合物、免疫动物的方法、治疗严重急性呼吸道综合征SARS的方法、诊断SARS的方法和试剂盒。

根据本申请的一些实施方案，提供了一种抗原片段或多肽，其包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸片段。

根据本申请的一些实施方案，提供了SEQ ID NO:1所示的抗原片段在制备预防病毒感染的疫苗中的用途。

根据本申请的一些实施方案，提供了编码SEQ ID NO:1所示的抗原片段的核酸。

在一些实施方案中，所述病毒感染是指冠状病毒感染，例如SARS-CoV或其变种。

根据本申请的一些实施方案，提供了一种制备疫苗的方法，包括将前述抗原片段作为免疫原的步骤。在一些实施方案中，制备疫苗的方法包括：将所述抗原片段与载体蛋白结合成偶联物，然后将偶联物进行纯化的步骤。