[发明专利]热休克蛋白90kDa αB1在检测可吸入性颗粒物导致蛋白变性程度中的应用

说明书

本发明公开了热休克蛋白90kDa αB1在检测可吸入性颗粒物导致蛋白变性程度中的应用。本发明将热休克蛋白90kDa αB1与表面蛋白冠中含有变性蛋白的可吸入性颗粒物共同孵育，通过蛋白冠分离和蛋白质免疫印迹技术检测热休克蛋白90kDa αB1相对于颗粒表面所吸附蛋白含量的比值，可相对定量地评价可吸入性颗粒物表面蛋白变性的程度，从而判断可吸入性颗粒物通过变性蛋白可能导致的细胞毒性反应。与通过圆二色谱技术在含有可吸入性颗粒物和蛋白的混合体系中检测变性蛋白不同，本发明能直接检测仅存在于可吸入性颗粒物表面的变性蛋白。可避免传统的可吸入性颗粒物诱导蛋白变性检测方法中存在的可吸入性颗粒物干扰问题，且灵敏度较高。

技术领域

本发明涉及热休克蛋白90kDa αB1在检测可吸入性颗粒物导致蛋白变性程度中的应用。

背景技术

随着社会工业化发展，工程化的纳米颗粒得到越来越广泛的应用；同时，空气中存在的可吸入颗粒物也越来越复杂。因此，多种纳米材料和可吸入颗粒物引发的环境与健康问题已成为大众关注的热点。流行病学的研究显示，长期暴露于可吸入性颗粒物可能会促进肺癌、肺炎、慢性肺阻塞和心脑血管相关疾病的发生和发展。可吸入性颗粒物包括空气中的空气动力学粒径小于等于2.5微米的颗粒物(particulate matter 2.5,PM2.5)、香烟烟雾颗粒以及四氧化三铁纳米颗粒。

可吸入颗粒物的来源主要包括燃煤、工厂有害气体排放、汽车尾气排放以及建筑扬尘等几个方面。近些年来，政府相关部门已出台一系列的大气污染防治措施，包括从源头控制工业气体的排放、加快经济发展模式转变、建立和健全环境保护相关的法律法规、加速大气污染与疾病发生相关的科研公关和加强雾霾防治宣传等。但需要注意的是，现有措施还不能发挥关键作用，从环境治理和发展模式上入手在短期内无法有效改善可吸入性颗粒物引起肺部相关疾病和心脑血管疾病高发的现象。因此，加快在体内外对纳米生物毒性的研究更有助于我们发现可吸入性颗粒物导致疾病产生的主要途径和具体机制。

纳米颗粒进入体内后能够吸附以蛋白质为主的生物大分子，形成蛋白冠，并通过蛋白冠发挥生物学效应或毒性。纳米颗粒与蛋白作用的研究显示，颗粒吸附蛋白质后可诱导其发生错误折叠，这很有可能诱导蛋白变性相关细胞反应或病理过程发生。对纳米颗粒表面的变性蛋白进行精确定量有助于评价颗粒在体内的生物毒性。在已应用的变性蛋白检测方法中，圆二色谱、傅里叶红外光谱和拉曼光谱等方法可以从不同角度得出一定的蛋白变性信息，但它们都不能很好地从蛋白质体系中区分颗粒表面存在的变性蛋白，同时颗粒很有可能会干扰这些检测；因此，一种可以定量检测仅存在于颗粒表面的变性蛋白且不受颗粒干扰的检测方法是迫切需要的。

发明内容

本发明的目的是提供了热休克蛋白90kDa αB1在检测可吸入性颗粒物导致蛋白变性程度中的应用。

本发明的技术方案如下：

热休克蛋白90kDa αB1在检测可吸入性颗粒物导致蛋白变性程度中的应用。

优选的，所述可吸入性颗粒物为空气中的空气动力学粒径小于等于2.5微米的颗粒物、香烟烟雾颗粒或四氧化三铁纳米颗粒。所有颗粒物的粒径均应满足小于等于2.5微米。

优选的，所述蛋白为血清白蛋白、溶菌酶蛋白、肌红蛋白、铁蛋白或血红蛋白。

优选的，其步骤包括：

(1)将可吸入性颗粒物与蛋白混合后孵育，然后过滤，洗涤，得到可吸入性颗粒物-蛋白复合物；

(2)可吸入性颗粒物-蛋白复合物配置成混悬液，加入热休克蛋白90kDaαB1后孵育一段时间，然后过滤，洗涤，得到可吸入性颗粒物-混合蛋白复合物；