[发明专利]一种检测粽子中微生物的方法

权利要求书

1.一种检测粽子中微生物的方法，其特征在于，所述步骤如下：

A.菌落总数的测定；B.霉菌和酵母计数；C.大肠菌群计数；

所述步骤A具体如下：

A1：从样品的不同部位取一定量的样品，分别加生理盐水均质，制成样品匀液；

A2：逐步按适当倍数进行稀释；

A3：选择2-3个稀释度适宜的样品均液，分别取1mL加入无菌培养皿中，每皿中加15-20mL融化并恒温至46℃的平板计数琼脂培养基，混匀。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照；

A4：待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃+1培养48+2h；

A5：计数各平板菌落数，计算平行板菌落数的平均值，再乘以相应的稀释倍数，作为每g样品中菌落总数的结果；

所述步骤B具体如下：

B1：从样品的不同部位取一定量的样品，分别加生理盐水均质，制成样品匀液；

B2：逐步按适当倍数进行稀释；

B3：选择2-3个稀释度适宜的样品均液，分别取1mL加入无菌培养皿中，每皿中加20-25mL融化并恒温至46℃的马铃薯葡萄糖琼脂培养基，混匀。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照；

B4：待琼脂凝固后，将平板翻转，28℃+1培养5d；

B5：计数各平板菌落数，计算平行板菌落数的平均值，再乘以相应的稀释倍数，作为每g样品中菌落总数的结果；

所述步骤C具体如下：

C1：从样品的不同部位取一定量的样品，分别加生理盐水均质，制成样品匀液；

C2：逐步按适当倍数进行稀释；

C3：选择2-3个稀释度适宜的样品均液，分别取1mL加入无菌培养皿中，每皿中加15-20mL融化并恒温至46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂，混匀。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照；

C4：待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃+1培养18-24h；

C5：计数各平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤C的C5步骤中从VRBA平板上挑取不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于煌绿乳糖胆盐肉汤管内，36℃+1培养24-48h，观察产气情况；

具体操作步骤如下：

(a)检查平板上有无呈紫红色，周围有红色的胆盐沉淀环的典型菌落；

(b)如有典型菌落，则从每个平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，少于10个菌落的挑取全部典型和可疑菌落分别移种于BGLB肉汤管内，36℃+1培养24-48h；

(c)观察产气情况，凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性；

(d)经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以平板菌落数的平均值，再乘以稀释倍数，即为每克样品中大肠菌群数。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，菌落计数时可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数；低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计；每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。