[发明专利]委陵菜酸的提取方法及其应用

说明书

本发明公开了一种委陵菜酸的提取方法及其应用。取方法包括以下步骤：1)以委陵菜全草为原料，先用乙醇溶液提取，提取液浓缩后，依次用石油醚、三氯甲烷室温萃取，去掉石油醚、三氯甲烷馏分后，再用乙酸乙酯萃取，萃取液回收乙酸乙酯，浓缩至膏状，干燥得到粗提物；2)粗提物先上硅胶色谱柱进行洗脱，洗脱剂为三氯甲烷、甲醇和水的混合物，先经第一次制备型HPLC，然后经Sephadex LH‑20柱层析，最后经第二次制备型HPLC；层析和两次HPLC的流动相均为甲醇溶液，最后可得到高纯度的产品。在本发明中，委陵菜酸应用于制备治疗肝纤维化、或抑制肝星状细胞增殖、或促进肝星状细胞凋亡、或抑制PI3K/Akt/mTOR和NF‑κB信号通路的药物中。

技术领域

本发明属于植物提取物技术领域，具体涉及一种委陵菜酸的提取方法及其应用。

背景技术

肝纤维化(liver fibroisis)是多种原因引起的慢性肝损伤所致的病理改变，其特征为 细胞外基质(extracellular matrix，ECM)在肝内过度沉积，是肝硬化的早期可逆阶段。有 多项研究证实，肝星状细胞(hepatic stellate cells，HSCs)的激活在肝纤维化发展过程 中起关键作用，是肝内ECM的主要细胞来源。抑制HSCs活化、增殖与减少ECM合成是目前阻 断、逆转肝纤维化的重要策略。

在中药领域，中药材委陵菜为蔷薇科植物委陵菜(Potentillachinensis Ser.)的干燥 全草，其味苦，性寒，归肝、大肠经，清热解毒，凉血止痢，常用于赤痢腹痛、久痢不止、痔疮出血、痈肿疮毒等。委陵菜酸(Tormentic acid)是从委陵菜全草中分离得到一个活性成分。如何从委陵菜中提取高纯度的委陵菜酸是研究委陵菜酸，尤其是将委陵菜酸应用于治 疗肝纤维化等疾病的关键之一。

发明内容

本发明的第一目的是提供一种委陵菜酸的提取方法。

所述提取方法包括以下步骤：

1)以委陵菜全草为原料，先用乙醇溶液提取，提取液浓缩后，依次用石油醚、三氯甲烷 室温萃取，去掉石油醚、三氯甲烷馏分后，再用乙酸乙酯萃取，萃取液回收乙酸乙酯，浓缩 至膏状，干燥得到粗提物；

2)粗提物先上硅胶色谱柱进行洗脱，流动相为三氯甲烷、甲醇和水的混合物，三者的体 积比为60:35:5；洗脱液回收有机溶剂后，先经第一次制备型HPLC收集含委陵菜酸的馏分， 然后经Sephadex LH-20柱层析，最后经第二次制备型HPLC收集含委陵菜酸的馏分；层析和 两次HPLC的流动相均为甲醇溶液，并且在洗脱后回收甲醇，最后所得洗脱物即为产品。

步骤1)中：

所述委陵菜全草选用干燥全草，提取前最好先粉碎后过20目筛。

所述乙醇溶液提取的过程为：用原料重量5倍量的95％乙醇室温浸泡2小时，然后加热 回流提取3次，每次2小时，合并3次的乙醇提取液，真空回收乙醇，得到提取液。

所述提取液减压浓缩至比重为1:1。

所述石油醚、三氯甲烷和乙酸乙酯的用量均为萃取混合物重量的5倍量。

所述浓缩方式优选为减压浓缩。

整个步骤的目的为粗提，先用95％乙醇室温浸泡可以药材充分吸收乙醇，使之更容易提 出有效成分；用石油醚、三氯甲烷萃取，可以除去脂溶性高的成分，提高分离纯度；用正交 实验证明用5倍量乙酸乙酯进行萃取，在保证比较高的提取效率之外，还可以节省乙酸乙酯 的用量，综合效果好。

步骤2)中：

所述硅胶色谱柱的规格为200-300目、10×300cm；所述HPLC选用C₁₈柱。