[发明专利]苯甲酸半抗原、苯甲酸完全抗原及其制备方法与试剂条

说明书

本发明公开了一种苯甲酸半抗原、苯甲酸完全抗原及其制备方法与试剂条。该苯甲酸完全抗原中，其苯甲酸分子的抗原决定簇能充分暴露，且具有较完整的空间构象，因此，本发明提供的苯甲酸完全抗原具有较好的免疫原性,可用于免疫分析。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种苯甲酸半抗原、苯甲酸完全抗原 及其制备方法与试剂条。

背景技术

免疫分析是以抗原与抗体之间特异性识别和可逆性结合反应为基础的痕量 分析方法，其不仅适用于大分子化合物(如蛋白质、核酸、细菌)的检测，也 适用于小分子化合物(如激素、药物)的测定。建立小分子化合物的免疫分析 方法的关键是能够制备出对小分子化合物具有高亲和力和高选择性的抗体。由 于大多数小分子化合物的分子量小于1000，不具有免疫原性，即缺乏T细胞表 位而无法直接诱导动物机体等产生特异性抗体。然而，小分子化合物可以通过 适当的化学修饰方法，与大分子载体结合，生成小分子化合物-大分子载体的偶 联物，此偶联物即为完全抗原，它可以借助T细胞表位来间接诱导B细胞的增 殖及分化，产生特异性抗体。

苯甲酸(Melatonin,MLT)是一种小分子物质，化学名为N-乙酰-5-甲氧 基色胺，分子量仅为232.28D，不具有免疫原性，用于免疫，必须先与蛋白质大 分子载体结合，形成苯甲酸-蛋白质载体偶联的完全抗原后才具免疫原性。然而， 制备苯甲酸-蛋白质载体偶联的完全抗原不能影响苯甲酸的空间构象，而且需要 保持苯甲酸抗原决定簇(如5-甲氧基、N-烷基侧链)的有效性，才能获得效价 高、特异性强的苯甲酸抗体。因此，如何制备具有良好免疫原性的完全抗原是 建立测定苯甲酸的免疫分析方法的难点。

发明内容

本发明提供了一种苯甲酸半抗原，旨在解决上述问题。

根据本申请实施例的第一方面，提供了一种苯甲酸半抗原，其结构式为：

根据本申请实施例的第二方面，提供了一种苯甲酸完全抗原的制备方法， 包括以下步骤：

提供苯甲酸；

将所述苯甲酸溶于适量蒸馏水中，并将PH调至1～2，在4℃环境下冰浴搅 拌10分钟，得到反应液；

将预冷的1M亚硝酸钠溶液缓慢加到反应液中，在4℃环境下继续反应30分 钟，得到如权利要求1所述的苯甲酸半抗原。

根据本申请实施例的第三方面，提供了一种苯甲酸完全抗原，其结构式为：

结构式中，R为载体蛋白，n为5_～20的自然数。

根据本申请实施例的第四方面，提供了一种苯甲酸完全抗原的制备方法， 包括以下步骤：

将如权利要求1所述的苯甲酸半抗原在0～4℃保存，以得到第一反应液；

配置载体蛋白的磷酸盐缓冲液；

将所述第一反应液逐滴加入到所述载体蛋白的磷酸盐缓冲液中，在0～4℃环 境下搅拌，得到含苯甲酸完全抗原的混合溶液；

将所述混合溶液进行透析后离心，得到含苯甲酸完全抗原的上清溶液。

根据本申请实施例的第四方面，提供了一种检测苯甲酸的胶体金免疫层析 试剂条，包括背板、样品垫、金标垫、反应垫和吸水垫，其中所述样品垫、金 标垫、反应垫和吸水垫依次设置于所述背板上；所述反应垫上具有检测线和质 控线，所述检测线包被有苯甲酸完全抗原，所述质控线包被有抗苯甲酸抗体金 标复合物的抗体，所述金标垫上喷有苯甲酸抗体金标复合物，所述苯甲酸完全 抗原的结构式为