[发明专利]一种检测辣椒素的竞争型免疫传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种检测辣椒素类物质的竞争型电化学免疫传感器在食用植物油掺伪检测中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

将食用植物油样品加入70%甲醇-磷酸盐缓冲液（v/v）中，4000 rpm离心约1 min, 4℃静置20 min，将得到的甲醇-磷酸盐缓冲液稀释5倍，制备不同浓度的辣椒素标准溶液；向辣椒素类物质电化学免疫传感器表面滴加5 μL不同浓度的辣椒素标准溶液和辣椒素类物质抗体的混合溶液，37℃温育反应70分钟后采用pH=7.5的磷酸盐缓冲液冲洗掉未与抗原结合的抗体和标准品，在5 mM铁氰化钾溶液中，用差分脉冲伏安法记录电流响应值，从而计算出食用植物油样品溶液中辣椒素类物质的含量；

所述传感器的制备方法是通过将四氧化三铁-二氧化铈（Fe₃O₄-CeO₂）以滴涂的方式修饰在玻碳电极表面来增强电极的导电性和固定辣椒素类物质抗原，后用BSA封闭非特异性位点，实现传感器的构建，包括如下步骤：

（1）玻碳电极预处理：首先将裸玻碳电极在0.3 μm氧化铝泥浆中进行抛光至镜面，然后将其先后在超纯水和无水乙醇中分别超声1分钟并用氮气吹干，最后将玻碳电极在浓度为5mM铁氰化钾溶液中，用循环伏安法测定其电位差小于80 mV，4℃保存，备用；

（2）制备修饰电极：首先将Fe₃O₄-CeO₂复合材料通过滴涂的方式固定在电极表面，室温干燥，制得修饰电极；

（3）固定辣椒素类物质抗原：将步骤（2）制得的电极浸入适合浓度的辣椒素类物质抗原溶液中，4℃孵育过夜，使辣椒素类物质抗原固定在Fe₃O₄-CeO₂复合材料层；

（4）滴涂BSA封闭液以封闭电极表面非特异性结合位点，冲洗并吹干，制得所述辣椒素类物质的竞争型电化学免疫传感器；

其中，步骤（2）所述Fe₃O₄-CeO₂复合材料，其制备过程是：称取 0.5 g壳聚糖，溶于50 mL1.0%乙酸溶液中，室温下搅拌3小时，使壳聚糖完全溶解后，将10 mg Fe₃O₄加入上述溶液中，超声搅拌至得到黄色分散液；最后向混合溶液中加入10 mg CeO₂继续超声分散至得到咖啡色分散液，即可得到Fe₃O₄-CeO₂复合材料；

步骤（3）中所述适合浓度的辣椒素类物质抗原溶液，是指浓度为9 μg/mL的辣椒素类物质抗原溶液；

步骤（4）所述滴涂BSA封闭液以封闭电极表面非特异性结合位点，冲洗并吹干，是用pH=7.5的磷酸盐缓冲液冲洗干净后，继续滴加5 μL质量分数为0.5%的BSA，室温封闭70分钟；将所得电极用pH=7.5的磷酸盐缓冲液冲洗干净并吹干。