[发明专利]一种兔病毒性出血症病毒Ⅱ型VLP疫苗

说明书

本发明提供一种兔病毒性出血症病毒的病毒样颗粒及其制备方法，所提供的病毒样颗粒，是重组杆状病毒感染昆虫细胞后，培养收集获得的；所述的重组杆状病毒，其中包含有编码VP60蛋白的核苷酸片段；所述的VP60蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID NO:4。本发明还提供一种兔病毒性出血症病毒亚单位疫苗，包括有抗原和疫苗佐剂，其所用的抗原为本发明制备的病毒样颗粒。VLP在空间构想上更类似与天然病毒，可同时刺激机体产生细胞免疫和体液免疫，免疫效果好，且由于VLP不含有病毒核酸，不存在潜在的病毒致病基因，安全性更高。

技术领域

本发明属于疫苗制备技术领域，具体涉及一种兔病毒性出血症病毒Ⅱ型VLP亚单位疫苗。

背景技术

兔瘟，又称兔病毒性出血症(rabbit hemorrhagic disease，RHD)，是由兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus，RHDV)引起家兔的一种急性、高度致死性传染病。1984年我国首次报道RHD后，世界很多国家相继报道RHD的发生和流行。2010年法国首次报道了RHDV新毒株，研究者将其命名为RHDV2。相比于经典RHDV，各日龄家兔、野兔均对RHDV2易感，这亦是在他国暴发疫情后，RHDV2迅速取代经典RHDV成为流行毒株的主要原因。RHDV2严重影响养兔业发展，造成巨大的经济损失，同时还导致全球野兔种群数量的急剧减少，破坏生态平衡，给人类社会、民众健康带来严重的负面影响。

兔病毒性出血症病毒属嵌杯病毒科(Caliciviridae)兔病毒属(Lagovirus)，为单股正链RNA病毒，由7437个核苷酸组成。RHDV病毒基因组只有2个开放阅读框。病毒编码的主要结构蛋白VP60，其基因片段长度为1740bp，共编码580个氨基酸。

疫苗是预防和控制该病的主要措施。目前，市场上还没有真正批准上市的RHDV2疫苗。基因工程亚单位疫苗是现代基因工程技术的成果结晶，凭借其无可比拟的高安全性、稳定性和低生产成本，使其成为现代疫苗制备领域的宠儿，亚单位疫苗尤其是类病毒样颗粒疫苗(Virus like particles，VLPs)，这类疫苗不含有核酸物质，安全性较好，接种后不会产生持续感染或潜伏感染，产生的免疫应答可以与野毒感染相区分，有利于疫病的控制和消灭。不同于原核表达系统、酵母及哺乳动物细胞真核表达系统，杆状病毒表达系统作为真核表达系统之一拥有外源插入基因容量大、蛋白表达水平高、操作简便及翻译后加工修饰等诸多优点而得到广泛应用。

发明内容

本发明提供一种兔病毒性出血症病毒的病毒样颗粒及其制备方法，从而弥补现有技术的不足。

本发明首先提供一种重组杆状病毒，其中包含有编码VP60蛋白的核苷酸片段；所述的VP60蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID NO:4；

所述的编码VP60蛋白的核苷酸片段，其序列为SEQ ID NO:3；

本发明所构建的重组杆状病毒用于在昆虫细胞中制备兔病毒性出血症病毒的病毒样颗粒；

本发明再一个方面提供一种兔病毒性出血症病毒的病毒样颗粒，是使用上述的重组杆状病毒感染昆虫细胞后，培养收集获得的。

所述的昆虫细胞为昆虫细胞Sf9；

本发明所制备的病毒样颗粒用于制备疫苗；

本发明还提供一种兔病毒性出血症病毒亚单位疫苗，包括有抗原和疫苗佐剂，其所用的抗原为本发明制备的病毒样颗粒。

本发明制备的疫苗免疫兔后能提高兔的抗体滴度，预防兔病毒性出血症病毒的感染。VLP在空间构想上更类似与天然病毒，可同时刺激机体产生细胞免疫和体液免疫，免疫效果好，且由于VLP不含有病毒核酸，不存在潜在的病毒致病基因，安全性更高。因此，利用基因工程手段研制RHDV-VLP疫苗填补了国内的空白，具有商业价值。

附图说明