[发明专利]一种检测血清中抗癫痫药物浓度的方法

权利要求书

1.一种检测血清中抗癫痫药物浓度的方法，其特征在于，

所述抗癫痫药物分别为：左乙拉西坦、10-羟卡马西平、卡马西平、奥卡西平、苯妥英、拉莫三嗪、丙戊酸、苯巴比妥、托吡酯和氯硝西泮；

所述抗癫痫药物对应的内标物分别为：左乙拉西坦-d3、10-羟卡马西平-d4、卡马西平-d2,15N、奥卡西平-d4、苯妥英-d10、拉莫三嗪-13C3、丙戊酸-d6、苯巴比妥-d5、托吡酯-d12和氯硝西泮-d4；

采用超高效液相色谱串联质谱技术检测经过预处理的血清中的上述抗癫痫药物，先利用超高效液相色谱将待测物与血清基质分离，再利用质谱同位素内标定量法，以标准品与内标物的浓度比为X轴，标准品与内标物的峰面积比为Y轴，建立校准曲线，计算上述抗癫痫药物的含量，具体色谱条件为：

(1)超高效液相色谱条件：

流动相A：0.01％～0.2％甲酸-0.1mM～10mM甲酸铵水溶液；流动相B：乙腈；

色谱柱型号：ACQUITY UPLC BEH C₁₈；

采用流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱的方式，所述梯度洗脱过程如下：在0-3.0分钟内，流动相A和流动相B的体积比由92:8匀速渐变至35:65；在3.0-3.5分钟内，流动相A和流动相B的体积比由35:65匀速渐变至2:98；在3.5-6.0分钟内，流动相A和流动相B的体积比由2:98变至92:8；每个样品采集时间为6.0min；

(2)质谱条件：

在电喷雾电离正负切换检测模式下，采用多反应监测的质谱扫描模式，毛细管电压为3.0kV(ESI+)/2.5kV(ESI-)；源温度为120℃；脱溶剂气温度为400℃，脱溶剂气流速为800L/h，锥孔气流速为150L/h；同时监测了各目标物及其对应同位素内标。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

所述流动相A为0.01％～0.15％甲酸-0.1mM～5mM甲酸铵水溶液；流速为0.2～0.5mL/min；柱温为30～50℃；进样体积为0.2～5μL。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，

所述流动相A为0.1％甲酸-2mM甲酸铵水溶液；所述流速为0.3mL/min；所述柱温为45℃；所述进样体积为1μL。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述血清为人或动物的血清。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

所述经过预处理的血清按照如下方法制备：向血清中加入含内标的蛋白沉淀剂，再振荡离心后取上清液；所述蛋白质沉淀剂为甲醇与乙腈混合溶液；优选地，甲醇与乙腈混合溶液中甲醇与乙腈的体积比为1:1～5；更优选地，所述蛋白质沉淀剂中甲醇与乙腈的体积比1:3。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，

所述经过预处理的血清按照如下方法制备：取50μL血清于1.5mL离心管中，向其中加入200μL含内标的蛋白质沉淀剂，振荡3～5min，在12000～15000r/min，1～5℃离心4～10min后，转移离心管中的上清液60μL至塑料内衬管中，待进样；所述蛋白质沉淀剂中甲醇与乙腈的体积比1:3。