[发明专利]抗肌酸激酶同工酶抗体及其制备方法、应用、氨基酸序列

权利要求书

1.抗肌酸激酶同工酶抗体，其特征是：

所述抗体由重链和轻链组成；

所述重链和轻链为以下三种组合形式中的任意一种：

组合形式之一为：

所述重链的氨基酸序列为SEQ ID NO：3所示的序列；

所述轻链的氨基酸序列为SEQ ID NO：4所示的序列；

组合形式之二为：

所述重链的氨基酸序列为SEQ ID NO：5所示的序列；

所述轻链的氨基酸序列为SEQ ID NO：6所示的序列；

组合形式之三为：

所述重链的氨基酸序列为SEQ ID NO：7所示的序列；

所述轻链的氨基酸序列为SEQ ID NO：8所示的序列；

且所述抗体与肌酸激酶同工酶结合。

2.如权利要求1所述的抗肌酸激酶同工酶抗体的制备方法，其特征是：包括以下步骤，

（A）获取重链和轻链的基因；

（B）使用全基因合成手段将测序合格的重链和轻链的基因序列插入到重轻链表达质粒中；

（C）将表达质粒转化到感受态细胞中；

（D）从复苏细菌中提取去内毒素的表达质粒；

（E）选用HEK293细胞，并对HEK293细胞进行传代培养；

（F）瞬时转染HEK293细胞；

（G）重组抗体纯化。

3.根据权利要求2所述的抗肌酸激酶同工酶抗体的制备方法，其特征是：

所述步骤（A）中的获取包括以下步骤，

（A1）设计重链引物和轻链引物，并进行相应免疫球蛋白G基因序列的合成；

（A2）从杂交瘤细胞总RNA逆转录模版中钓取抗肌酸激酶同工酶抗体重链和轻链基因；

（A3）将钓取出来的基因序列插入T载体后测序。

4.根据权利要求3所述的抗肌酸激酶同工酶抗体的制备方法，其特征是：所述步骤（A1）中，选取与肌酸激酶同工酶结合的单克隆抗体之轻链氨基酸序列与重链氨基酸序列，所述轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述重链氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，根据SEQID NO：2之序列和SEQ ID NO：1之序列可变区的V基因和CH区、CL区的保守序列特征，分别设计重链引物和轻链引物，并利用杂交瘤细胞进行相应免疫球蛋白G基因序列的合成。

5.根据权利要求3所述的抗肌酸激酶同工酶抗体的制备方法，其特征是：所述步骤（A2）中的钓取包括以下步骤，

（A21）取一个0.2mL的离心管，在离心管中分别加入10μL的5хTaq Buffer试剂、4μL10mM each的dNTPMixtur试剂、1μL的杂交瘤细胞总RNA逆转录模版、5μL的重链引物、5μL的轻链引物、24.75μL的ddH₂O试剂和0.25μL 5u/μL的Taq DNA polymerase试剂，然后将离心管中的混合物振荡混匀后，放置在离心机上离心；

（A22）将步骤（A21）中的离心管放置在基因扩增仪模块中进行扩增。

6.如权利要求1所述抗肌酸激酶同工酶抗体在制备急性心肌梗塞早期诊断试剂盒中的应用。