[发明专利]一种具有快速生长高转化能力的4-BA副偶然分支杆菌菌株及其制备方法

说明书

本发明涉及菌种选育领域，具体涉及一种具有快速生长高转化能力的4‑BA副偶然分支杆菌菌株及其制备方法。具有快速生长高转化能力的4‑BA副偶然分支杆菌菌株(Mycobacterium parafortuitum)，分类命名Mycobacterium parafortuitum BK047，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2020076。本发明提供的具有快速生长高转化能力的4‑BA副偶然分支杆菌菌株，同时具备高转化能力以及快速生长能力，有利于提高甾醇投料浓度，加速转化时间，降低了生产成本，提高了生产效率。

技术领域

本发明涉及菌种选育领域，具体涉及一种具有快速生长高转化能力的4-BA副偶然分支杆菌菌株及其制备方法。

背景技术

甾体类药物是临床上不可缺少的一类药物，对机体起着非常重要的调节作用。如肾上腺皮质激素具有抗炎症、抗过敏、抗休克、抗变态反应等功效，广泛用于治疗类风湿性关节炎、支气管哮喘和湿疹等皮肤病，可治疗和缓解胶原性疾病、过敏性休克等难治或危险性疾病，也是治疗爱迪森氏等内分泌疾病的不可缺少的药物。

甾体类药物是销售额仅次于抗生素的世界第二大类药物，不同的甾体药物分子结构均由甾体类药物中间体衍生而来。20α-羟甲基-孕甾-4-烯-3-酮(Bisnoralcohol)简称4-BA，是一种关键的甾体类药物中间体，在甾体工业化生产中起着重要作用。利用4-BA为前体物可以合成黄体酮、17α-羟基黄体酮、氢化可的松、倍他米松、地塞米松、可的松、氟美松、依普利酮等多种重要的甾体原料药，具有重要的商业价值。

目前主要是运用微生物法转化植物甾醇来生产4-BA。但生产上存在的问题是：现有的4-BA菌株虽然转化能力较强，但其种子生长周期较长，从而严重制约了产量的提升，增加了生产成本，影响生产效率。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中的4-BA菌株种子生长周期较长，导致生产效率较低，生产成本较高的缺陷，从而提供一种具有快速生长高转化能力的4-BA副偶然分支杆菌菌株及其制备方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种具有快速生长高转化能力的4-BA副偶然分支杆菌菌株(Mycobacteriumparafortuitum)，分类命名Mycobacterium parafortuitum BK047，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2020076。

一种制备如上述的具有快速生长高转化能力的4-BA副偶然分支杆菌菌株的方法，包括以下步骤：

将具有高转化能力的4-BA菌株sp1及具有快速生长能力的4-BA菌株sp2在聚乙二醇体系中进行原生质体融合，得到融合子后，对融合子进行筛选得到具有快速生长高转化能力的4-BA副偶然分支杆菌菌株。

进一步的，所述聚乙二醇为PEG4000-6000，体积浓度为40％-60％。

进一步的，所述原生质体融合包括以下步骤：

原生质体的制备：将菌株sp1及菌株sp2分别在液体完全培养基上进行菌体培养，使细胞生长进入对数生长期后，进行脱壁，分别得到菌株sp1及菌株sp2的原生质体悬液；

原生质体再生：将菌株sp1及菌株sp2的原生质体悬液分别在再生补充基本固体培养基上进行再生培养，得到两株亲本的再生原生质体悬液；

原生质体融合：分别取菌株sp1及菌株sp2的再生原生质体悬液，混合后离心，弃上清液，并于沉淀中加入原生质体稳定液及聚乙二醇溶液，进行原生质体融合。

进一步的，所述液体完全培养基包括以下组分：