[发明专利]一种与辣椒果实角质层缺乏基因连锁的分子标记及应用有效
| 申请号： | 202010480619.2 | 申请日： | 2020-05-30 |
| 公开（公告）号： | CN111560459B | 公开（公告）日： | 2023-05-02 |
| 发明（设计）人： | 刘峰;谢玲玲;易婷;郑井元;周书栋;马艳青;戴雄泽;邹学校 | 申请（专利权）人： | 湖南农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895 |
| 代理公司： | 长沙市融智专利事务所(普通合伙) 43114 | 代理人： | 袁靖 |
| 地址： | 410128 *** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 辣椒 果实 角质层 缺乏 基因 连锁 分子 标记 应用 | ||
1. 一种与辣椒果实角质层合成基因连锁的分子标记，其特征在于，为辣椒基因组12号染色体上200104484bp位置处发生的G向A的突变，所述的分子标记的引物包括两条正向引物和一条反向引物，
正向引物X：CTTAGAAGGAGAGGCTGACAAGTG
正向引物Y：CTTAGAAGGAGAGGCTGACAAGTA；
反向引物：CGCTGACGAGAACTAGACATCTG；
所述的分子标记对应的基因型：G:G为具有果实角质层的基因型、A:G为具有果实角质层的基因型、A:A为不具有果实角质层的基因型。
2.根据权利要求1所述的分子标记，其特征在于：两条正向引物分别连接不同的荧光接头序列为：
FAM：GAAGGTGACCAAGTTCATGCT；
HEX：GAAGGTCGGAGTCAACGGATT。
3.权利要求1-2任一项所述的分子标记的应用，其特征在于：用于鉴定和辅助筛选果实角质层缺乏型辣椒。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：用于果实角质层缺乏型辣椒突变体育种。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：采用PCR反应进行检测。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：具体包括以下步骤：
(1)以待测样品基因组DNA为模板，利用分子标记的扩增引物进行Touc-hdown PCR扩增，获得扩增产物；
(2)对扩增产物进行检测与分析。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：对扩增产物进行荧光检测时，若是G:G基因型，则判定为果实表面具有角质层的野生纯合单株；若是A:A基因型，则判定为果实表面不具有角质层的突变纯合单株；若是A:G基因型，则判定为果实表面具有角质层的杂合单株。
8.根据权利要求7所述的应用，采用Touchdown PCR；
Touchdown PCR扩增程序为：94℃15min；95℃20s；65℃-56℃60s，10个循环，每个循环退火延伸温度降0.8℃；94℃20s；57℃60s，26个循环。
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