[发明专利]贝莱斯芽孢杆菌G9y及其在人参皂苷生物转化中的应用

权利要求书

1.贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis sp.)G9y，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，邮编430072，保藏日期为2019年10月17日，保藏编号为CCTCC No：M 2019837。

2.如权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis sp.)G9y在人参皂苷生物转化中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的应用为：将贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis sp.)G9y经培养，制得菌液；然后以人参皂苷Rc或含有Rc的人参皂苷原料为底物，与G9y菌液混合发酵，将Rc转化为人参皂苷Rd。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，按如下步骤操作：

(1)斜面培养：将菌株G9y接种于牛肉膏蛋白胨斜面培养基或LB斜面培养基，30～40℃培养24～48h，获得菌体斜面；

(2)种子培养：从步骤(1)菌体斜面上挑取菌体接种至牛肉膏蛋白胨液体培养基或LB液体培养基中，于35～45℃、pH5～8培养12～24h，制得G9y种子液；

(3)扩大培养：将步骤(2)获得的种子液以体积浓度1～20％的接种量接种至牛肉膏蛋白胨液体培养基或LB液体培养基中，于35～45℃、pH6～8培养2～12h，制得G9y培养液，作为G9y菌液用于人参皂苷Rc的发酵转化；

(4)发酵转化：将人参皂苷Rc或含有Rc的人参皂苷原料与步骤(3)的G9y培养液均匀混合，于38～48℃、pH6～8发酵转化12～48h，将Rc转化为人参皂苷Rd。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，按如下步骤操作：

(1)斜面培养：将菌株G9y接种于牛肉膏蛋白胨斜面培养基或LB斜面培养基，30～40℃培养24～48h，获得菌体斜面；

(2)种子培养：从步骤(1)菌体斜面上挑取菌体接种至牛肉膏蛋白胨液体培养基或LB液体培养基中，35～45℃、pH5～8培养12～24h，制得G9y种子液；

(3)扩大培养：将步骤(2)获得的种子液以体积浓度1～20％的接种量接种至牛肉膏蛋白胨液体培养基或LB液体培养基中，35～45℃、pH6～8培养12～24h，制得G9y培养液；

(4)菌体提纯：将G9y培养液离心，弃上清液，沉淀用的磷酸缓冲液悬浮，制得G9y菌液，用于人参皂苷Rc的发酵转化；

(5)发酵转化：将人参皂苷Rc或含有Rc的人参皂苷原料与步骤(4)的G9y菌液均匀混合，于38～48℃、pH6～8发酵转化12～48h，将Rc转化为人参皂苷Rd。

6.如权利要求3～5任意一项所述的应用，其特征在于，所述人参皂苷Rc或含有Rc的人参皂苷原料与G9y菌液混合的发酵液中，初始人参皂苷Rc含量按质量计为0.01～1％，初始G9y菌体浓度为1×10⁶～5×10⁸个/ml。

7.如权利要求3～5任意一项所述的应用，其特征在于，所述人参皂苷原料为含有Rc的天然人参皂苷提取物、或含有Rc的天然药材原料。

8.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述G9y培养液离心条件为3500～10000rpm，8～15min；所述磷酸缓冲液的浓度为0.05～0.15mol/L，pH值为7.0。

9.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述含有Rc的天然药材原料包含人参、西洋参、三七中的一种或多种混合物。