[发明专利]一种包含特异性结合ROS1的单克隆抗体的癌症检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种包含特异性结合ROS1的单克隆抗体的癌症试剂盒，其中的单克隆抗体是以筛选得到的ROS1激酶结构域作为抗原，通过免疫小鼠制备得到的，该抗体具有较好的结合特异性，并且验证了其具有抑制肿瘤细胞生长的功能，具有较好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物领域，更具体的涉及一种包含特异性结合ROS1的单克隆抗体的癌症检测试剂盒。

背景技术

ROS1是一种致癌基因序列，可与gag基因融合，融合后具有一定的致瘤性。野生型ROS1基因定位于6号染色体q12区。编码2347个氨基酸，分子量为259kDa。编码蛋白为跨膜型酪氨酸激酶受体蛋白，由酪氨酸激酶区、跨膜区及含糖基化位点的细胞外区三部分组成。N-端1861个氨基酸构成胞外区，跨膜区约由1882个氨基酸构成，C-端464个氨基酸构成胞质区。胞膜区由3个YWTD域折叠成3个β-螺旋结构，穿插在9个III型纤连蛋白骨架中。目前尚未发现与ROS1/RTK结合的配体。ROS1基因的突变、重排、过表达等皆会导致ROS1蛋白的失调，进而由异常的ROS1蛋白激酶活性激活下游多条致癌信号途径，包括PI3K/AKT/mTOR,STAT3,RAS-MAPK/ERK、VAV3和SHP-1/2等。

目前各项研究所报道的肺癌ROS1融合基因检测的阳性率差别较大，在腺癌中的阳性率约为1％-3.4％，除了病例选择的偏倚，检测方法及结果评价标准不统一等也可能是主要原因。重排基因常用的检测方法主要包括免疫组织化学(IHC),实时定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)和荧光原位杂交技术(FISH」等。美国食品与药品管理局(FDA)己批准FISH用于NSCLC患者中ALK融合基因检测，而ROS1融合基因检测手段还没有统一的标准。IHC方法快速、经济、简便，其敏感度取决于组织中ROS1融合蛋白的表达量和相应抗体的敏感性及特异性。RT-PCR方法可明确融合型，其所需组织量极少，但不能检测未知的融合基因类型，且RT-PCR对组织中DNA质量有较高要求。FISH在检测未知融合基因型方面具有独特的优势，是其他两种方法所不能及的，检测特异性也较高，但检测成本通常较高、结果难于判读。Yoshiyuki等基于NanoString技术检测肺癌肿瘤组织中的RNA，鉴定出GOPC-ROS1(FIG-ROS1融合基因并用RT-PCR进行确认。目前认为NanoString技术在所有转录水平的基因表达模式与实时定量PCR有着极佳的关联，且灵敏度和特异性与qPCR相当。

由于ALK和ROS1的激酶结构域的相似性，研究者尝试将ALK抑制剂应用于ROS1重排患者的身上，结果表明除了艾乐替尼外，所有的ALK抑制剂均能有效的控制ROS1融合患者的病情。

克唑替尼是一种针对ALK、MET及ROS1基因重排的酪氨酸激酶抑制剂。最初是作为MET抑制剂研发的，其后被批准用于ALK融合患者的一线治疗。由于ALK和ROS1在激酶结构域有49％的氨基酸序列同源性，在三磷酸腺苷(ATP)结合位点上有77％的同源性，2014年Shaw等将ROS1重排的NSCLC患者纳入临床研究PROFILE1001的扩展队列，共50例NSCLC患者入组，其中有3例达到完全缓解，总体反应率为72％，中位无疾病进展时间为19.2个月。基于以上研究结果，克唑替尼被FDA和欧洲药品管理局(EMA)批准治疗晚期ROS1-重排的NSCLC。

目前针对ROS1开发的检测或者治疗药物已经有上市，但是开发针对ROS1特定结构域的单克隆抗体还没有相关的报道。

发明内容

本发明通过对现有技术的改进，提供了一种特异性结合ROS1激酶结构域的单克隆抗体。

本发明一方面，提供了一种特异性的ROS1激酶多肽片段，其序列如下：

1 ggdlltylrk armatfygpl ltlvdlvdlc vdiskgcvyl ermhfihrdl aarnclvsvk