[发明专利]一种天花粉蛋白的酶联免疫检测试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种用于天花粉蛋白检测的酶联免疫试剂盒，其特征在于，它是由TCS对照品、样品稀释液、酶标板、抗TCS的兔多克隆抗血清、抗TCS的单克隆抗体、羊抗鼠酶标二抗IgG-HRP、包被缓冲液、洗涤液、显色液和终止缓冲液组成；

所述抗TCS的兔多克隆抗血清是采用下述方法制备得到的：

(a1)将TCS对照品用pH值为7.5的PBS缓冲液溶解至1.0mg/mL，作为免疫原；

(a2)使用步骤(a1)中的TCS免疫原免疫新西兰大耳兔；所述免疫方法为足底及背部皮下多点注射，免疫剂量为1.0mg/只，免疫周期为2周/次，免疫次数为4次；

(a3)4次免疫结束后，收集兔血，离心以后即获得抗TCS兔多克隆抗血清；

所述抗TCS的单克隆抗体是采用下述方法制备得到的：

(b1)使用步骤(a1)中的TCS免疫原免疫Bal b/c雌性小白鼠；所述免疫方法为腹腔和背部皮下多点注射，免疫剂量为0.2mg/只，免疫周期为2周/次，免疫次数为4次；

(b2)4次免疫结束后，收集小鼠血清，通过直接酶联免疫检测法检测小鼠阳性；选取阳性最高的小鼠脾脏作为细胞融合的脾细胞来源；

(b3)取步骤(b2)中小鼠的脾细胞，按脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞数量比9：1，通过PEG法进行细胞融合；采用有限稀释法筛选分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株；采用直接酶联免疫检测法测定抗体效价，选择能识别TCS标准品溶液的高效价单克隆抗体，最后筛选得到稳定分泌识别TCS的抗体的单克隆杂交瘤细胞株，命名为2B10；

(b4)将步骤(b3)中获得的杂交瘤细胞株2B10扩大培养后，将其注射入小鼠腹腔，注射量10⁶个/只，然后制备腹水，收集腹水后，通过饱和硫酸铵法纯化，即获得抗TCS的单克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的用于天花粉蛋白检测的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述样品稀释液中Na₂HPO₄、KH₂PO₄和NaCl的浓度分别为0.02M、0.0015M和0.14M；吐温-20在样品稀释液中的体积百分含量为0.1％；明胶在样品稀释液中的质量百分含量为0.5％。

3.根据权利要求1所述的用于天花粉蛋白检测的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述包被缓冲液中Na₂CO₃和NaHCO₃的浓度分别为0.01M和0.04M，溶液pH值为9.6。

4.根据权利要求1所述的用于天花粉蛋白检测的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述洗涤液中Na₂HPO₄、KH₂PO₄、NaCl在洗涤液中的浓度分别为0.02M、0.0015M、0.14M，吐温-20在洗涤液中的体积百分含量为0.1％，pH值为7.5。

5.根据权利要求1所述的用于天花粉蛋白检测的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述显色液的溶剂为底物缓冲液，溶质为邻苯二胺和30％过氧化氢，其在显色液中的浓度分别为2mg/mL和1:2500(v:v)；所述底物缓冲液中柠檬酸三钠和Na₂HPO₄的浓度分别为0.01M和0.03M，pH值为5.5，所述显色液需现配现用。

6.根据权利要求1所述的用于天花粉蛋白检测的酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述终止缓冲液为浓度为2M的硫酸水溶液。