[发明专利]双功能氧化石墨烯复合材料及其检测贴壁细胞的应用

权利要求书

1.一种双功能氧化石墨烯复合材料用于检测贴壁细胞的应用，所述的双功能氧化石墨烯复合材料的制备方法经过下列步骤：

1）按计量将氧化石墨烯分散在pH＝6.0, 10 mM 2-吗啡磺酸缓冲液中，超声至氧化石墨烯完全分散后，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基丁二酰亚胺，室温下轻微摇动10-15 h进行活化；用pH=7.4, 10 mM磷酸盐缓冲液洗涤活化后的氧化石墨烯3次，最后分散在磷酸盐缓冲液中，加入1,6-己二胺在室温下振荡10-15 h，得到表面修饰氨基位点的氧化石墨烯；

2）按计量将2,4-二氟-3-甲酰基苯硼酸加入步骤1）所得表面修饰氨基位点的氧化石墨烯中，在室温下振荡10-15 h，用乙醇洗涤3次后分散于乙醇中，再加入溶于双蒸水的牛血清白蛋白溶液钝化2-5 h；用磷酸盐缓冲液洗涤3次，并再次分散于磷酸盐缓冲液中，得到硼酸接枝的氧化石墨烯；

3）按计量将酚酞溶于二甲基亚砜中，加入步骤2）所得硼酸接枝的氧化石墨烯中，室温振荡10-15 h；用磷酸盐缓冲液洗涤3次后，分散在磷酸盐缓冲液中，在4 ℃下保存，得到装载酚酞的硼亲和氧化石墨烯，即双功能氧化石墨烯复合材料；

所述的双功能氧化石墨烯复合材料原料的质量百分数组成：

（一）表面修饰氨基位点氧化石墨烯原料的质量百分数：

氧化石墨烯 14-20%

1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐 14-21%

N-羟基丁二酰亚胺 32-38%

1,6-已二胺 24-32%

上述的各原料的质量组成之和为100 %；

（二）硼酸接枝氧化石墨烯原料的质量百分数：

表面修饰氨基位点氧化石墨烯 0.04-0.08%

2,4-二氟-3-甲酰基苯硼酸 0.08-0.013%

牛血清白蛋白 0.087-0.093%

乙醇 88-93%

双蒸水 8.4-9.1%

上述的各原料的质量组成之和为100 %；

（三）装载酚酞硼亲和氧化石墨烯原料的质量百分数：

硼酸接枝氧化石墨烯 0.04-0.08%

酚酞 0.7-1.4%

二甲基亚砜 92-99%

上述的各原料的质量组成之和为100 %。

2.按照权利要求1所述的应用，其特征在于具体经过下列步骤：

1）弃去细胞培养板中细胞原培养基，用pH=7.4, 10 mM磷酸盐缓冲液淋洗；

2）加入双功能氧化石墨烯复合材料，以氧化石墨烯质量计20 μg /10⁵个细胞，室温下孵育30 min，结束后用磷酸盐缓冲液淋洗；

3）加入氢氧化钠溶液调pH=12.0，显色1 min后，通过酶标仪测定553 nm处的吸光度值。