[发明专利]一种烟草NtIAA27基因突变体及分子鉴定方法和应用

说明书

一种烟草NtIAA27基因突变体及分子鉴定方法和应用，所述烟草NtIAA27基因突变体为Ntiaa27‑1，其为烟草NtIAA27基因第576位的G突变为A，形成终止密码子，使该基因提前终止，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明的烟草NtIAA27基因突变体Ntiaa27‑1在基因发生突变后，烟草烟碱含量会明显上调，显著提高烟草品质，在烟草育种上具有极大的价值。

技术领域

本发明属于植物分子生物学领域，具体涉及一种烟草NtIAA27基因突变体Ntiaa27-1及其分子鉴定方法和应用。

背景技术

研究烟草尼古丁的代谢调控是非常有意义的一项工作，通过基因调控可以提供不同尼古丁含量的烟草品种，为烟草商业生产个性化烟碱烟草产品提供原材料。尼古丁对人体有很强的生理刺激作用，是烟草商业性使用的物质基础。许多世界顶级烟草公司如菲利普莫里斯、帝国烟草、日本烟草、英美烟草等公司都投入巨资对烟草尼古丁的代谢途径、调控机制进行研究。

尼古丁是一种吡啶类生物碱，主要存在于茄科烟草属(Nicotiana)植物中，是烟草体内的一种重要的次生代谢产物。烟草尼古丁的合成和转运受到多个因素的调控，目前已经鉴别和克隆出来了一些尼古丁合成途径中的关键基因，如QPT、PMT、MPO、JAZ、MYC2a等。

从分子生物学角度对尼古丁的合成代谢途径研究尚未完全透彻。通过氯离子通道调控尼古丁合成基因，从而影响尼古丁含量的研究未见报道。尼古丁调控基因对于烟草商业生产至关重要，目前大多数的烟碱合成基因相关专利都掌握在国外烟草公司手中。因此，研究尼古丁合成途径相关调控基因对中国烟草企业改良烟草产品中尼古丁含量具有重要意义。值得注意的是目前很多关于调控烟碱的基因都是以RNAi为主要技术方法进行验证基因功能，而这种方法的缺点就是可能会同时敲除与之同源的基因，另外非常重要的就是烟草育种不允许用转基因材料，因此为了育成高烟碱烟草材料，有必要通过EMS敲除的方法获得基因突变材料。

发明内容

本发明的目的是提供一种烟草NtIAA27基因突变体Ntiaa27-1及其分子鉴定方法，本发明还提供烟草NtIAA27基因突变体Ntiaa27-1的应用。

本发明采取的技术方案如下：

一种烟草NtIAA27基因突变体，所述烟草NtIAA27基因突变体为Ntiaa27-1，其为烟草NtIAA27基因第576位的G突变为A，形成终止密码子，使该基因提前终止，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

本发明所述烟草NtIAA27基因突变体Ntiaa27-1的分子鉴定方法，所述突变体Ntiaa27-1的DNA片段由以下引物对扩增得到，所述引物对的上游引物为NtIAA27 F，其核苷酸序列如SEQ ID N0.2所示，下游引物为NtIAA27 R，其核苷酸序列如SEQ ID N0.3所示。

本发明所述烟草NtIAA27基因突变体Ntiaa27-1用于制备高烟碱材料。

本发明的烟草NtIAA27基因突变体Ntiaa27-1在基因发生突变后，烟草烟碱含量会明显上调，显著提高烟草品质，在烟草育种上具有极大的价值。

附图说明

图1为所述烟草NtIAA27基因突变体Ntiaa27-1扩增条带；

图2为所述烟草NtIAA27基因突变体Ntiaa27-1测序结果；

图3为所述烟草NtIAA27基因突变体Ntiaa27-1单株与野生型单株烟碱含量。

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明做进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或者替换，均属本发明的保护范围。

1、烟草突变体材料的获得：