[发明专利]靶向冠状病毒SPIKE的武装嵌合抗原受体细胞及制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种特异性敲除SARS‑CoV‑2病毒RNA聚合酶构建的靶向SARS‑CoV‑2病毒SPIKE蛋白的武装嵌合抗原受体的编码氨基酸序列，及其修饰的免疫应答细胞，其的制备方法和应用。本发明通过特异性敲除SARS‑CoV‑2病毒RNA聚合酶构建了靶向SARS‑CoV‑2病毒SPIKE武装嵌合抗原受体的重组载体，并用其修饰免疫应答细胞的方法；获得的新型功能化免疫应答细胞能有效地靶向攻击多种病毒，本发明的靶向SARS‑CoV‑2病毒SPIKE的武装嵌合抗原受体修饰的免疫应答细胞制备方法步骤简单，获得的靶向病毒SPIKE和病毒复制依赖RNA聚合酶修饰的免疫应答细胞对冠状病毒有明显的杀伤作用。

技术领域

本发明属于免疫治疗生物医药技术领域，涉及一种特异性敲除SARS-CoV-2 病毒RNA聚合酶构建靶向SARS-CoV-2病毒的SPIKE蛋白拮抗细胞因子风暴的武装嵌合抗原受体的氨基酸编码序列、及其修饰的免疫应答细胞，以及它们的制备方法和在药物制备中的应用。

背景技术

冠状病毒是一个大型病毒家族，已知可引起感冒以及中东呼吸综合征(MERS)和严重急性呼吸综合征(SARS)等较严重疾病。新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株。人感染了冠状病毒后常见体征有呼吸道症状、发热、咳嗽、气促和呼吸困难等。在较严重病例中，感染可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭，甚至死亡。目前对于新型冠状病毒所致疾病没有特异有效治疗药物。

2020年1月21日，中国科学院上海巴斯德研究所、中国军事医学研究院国家应急防控药物工程技术研究中心等研究人员合作，通过对2019-nCoV(新型冠状病毒肺炎)的SPIKE蛋白结构的模型分析，揭示了新型冠状病毒与 SARS冠状病毒和MERS冠状病毒的遗传进化关系。同时，运用计算模拟技术推测出新型冠状病毒可能和SARS有同样的受体ACE2，并推测2019-nCoV与 SARS-CoV一样，是通过SPIKE蛋白与人细胞表面ACE2受体的介导作用进行入侵，来感染人的呼吸道上皮细胞(参见Xu Xintian等人，Science China Life Science，(2020))。McLellan团队的研究人员利用冷冻电镜技术解析了新型冠状病毒的SPIKE蛋白结构，还利用表面等离子共振技术(SPR)分析了SPIKE 蛋白与ACE2的亲和力，他们发现，ACE2蛋白与新型冠状病毒的亲和力是 SARS病毒的10到20倍(参见Daniel Wrapp等人，BioRxiv，(2020))，而不是之前的比SARS病毒弱。这也解释了为什么新冠病毒的传染性如此之强。新冠病毒主要的感染过程如下：病毒表面的SPIKE蛋白与细胞表面的受体 ACE2结合，使其进入宿主细胞。随后病毒RNA被释放到细胞质中，并通过复制、转录、翻译等过程形成新的病毒颗粒，经胞吐作用从被感染细胞中释放出来，继而感染新的细胞。所以，ACE2是这次新型冠状病毒感染的关键分子。综上，可以通过阻断受体ACE2与SPIKE蛋白作用阻止病毒侵入细胞。

此外，在冠状病毒的众多不同蛋白中，RNA依赖的RNA聚合酶即RdRp 在病毒的增殖复制期起到了非常重要的作用，它一方面以病毒RNA为模板复制子代病毒的基因，另一方面也将病毒增殖期间需要的蛋白质和酶类的基因转录成为mRNA，所以它担负了复制酶和转录酶双重功能。因此，RdRp能作为有效的治疗病毒的药物靶标。