[发明专利]无核酸扩增的ALDH2基因G1510A位点分型方法及所用探针和反应体系

权利要求书

1.无核酸扩增的ALDH2基因G1510A位点分型方法所用的反应探针，其特征是：由野生型探针和突变型探针组成；

野生型探针为WT1、uni，突变型探针为MT1、uni，

WT1:5’GGTCCCACACTCACAGTTTTCACTTC 3’，在探针5’端标记荧光基团；

uni:5’AGTGTATGCCTGCAGCCCGTACTCGC 3’，在探针5’端磷酸化修饰，在探针3’端标记淬灭基团；

MT1:5’GGTCCCACACTCACAGTTTTCACTTT 3’，在探针5’端标记荧光基团。

2.根据权利要求1所述的反应探针，其特征是：

所述荧光基团为以下任一：FAM、TET、J0E、HEX、Cy3、TAMRA、R0X；

所述淬灭基团为以下任一：Dabcyl、BHQ-1、BHQ-2。

3.包含如权利要求1或2所述反应探针的检测体系，其特征是：包括作为模板的待测DNA、10X反应缓冲液、WT1探针、MT1探针、Uni探针、耐高温的DNA连接酶。

4.根据权利要求3所述的检测体系，其特征是：耐高温的DNA连接酶为耐热DNA连接酶。

5.利用如权利要求3或4所述体系进行的无核酸扩增的ALDH2基因G1510A位点分型的非疾病诊断或治疗的方法，其特征是：

每个待测DNA作为模板分别设定使用野生型探针的野生型检测体系、以及使用突变型探针的突变型检测体系；

野生型检测体系/突变型检测体系分别于荧光定量PCR仪上，进行如下程序：

于起始时收集荧光值，且于所需个数的循环结束时收集荧光值；

依次进行以下步骤：

步骤1、首先判定反应结果，任选以下一种方法：

方法一、

当10个循环后的荧光相对值＜95％，反应结果属于阳性；

当10个循环后的荧光相对值≥95％，不做判断，需要等到40个循环后按照方法二再进行判断；

方法二、

当40个循环后的荧光相对值＜80％，反应结果属于阳性；

当40个循环后的荧光相对值＞90％，反应结果属于阴性；

80％≤当40个循环后的荧光相对值≤90％，反应结果属于临界区间；

方法一、方法二中，荧光相对值＝循环后对应的荧光值/起始荧光值；

步骤2、最终结果判读：

当野生型检测体系的反应结果为阳性、且突变型检测体系的反应结果为阴性时，判定该该待测DNA属于纯合野生型；

当野生型检测体系的反应结果为阳性、且突变型检测体系的反应结果为阳性时，判定该该待测DNA属于杂合型；

当野生型检测体系的反应结果为阴性、且突变型检测体系的反应结果为阳性时，判定该该待测DNA属于纯合突变型；

当野生型检测体系、突变型检测体系中只要有一个的反应结果属于临界区间时，或者当野生型检测体系和突变型检测体系的反应结果均为阴性时，判定需要对该待测DNA重新进行检测。