[发明专利]基于RNA分子标志物多重检测乳腺癌分型的组合物及试剂盒

说明书

本发明公开了基于RNA分子标志物多重检测乳腺癌分型的组合物及试剂盒，用于检测乳腺癌分型的多重检测，采用特异性多重一步法RT荧光PCR法在两个反应管中检测雌激素受体(ESR1)基因、孕激素受体(PGR)基因、人类表皮生长因子受体2(ERBB2)基因、增殖标志物KI‑67(MKI67)基因和内参基因(CALM2、B2M、RPLP0和TFRC)的mRNA表达量情况，用于判断待检乳腺癌样本属于哪种分子亚型，优化了多重逆转录检测体系，使得8个基因能在2管反应中得到准确检测，大大提高了检测通量、灵敏度、特异性，采用了4个内参基因作为归一化因子，排除了单内参基因在个别样本中的表达差异，提高了检测准确性。

技术领域

本发明属于基因检测的技术领域，具体涉及基于RNA分子标志物多重检测乳腺癌分型的组合物及试剂盒。

背景技术

目前，乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，据资料统计，发病率占全身各种恶性肿瘤的7～10％，在妇女仅次于子宫癌，它的发病常与遗传有关，以及40～60岁之间，绝经期前后的妇女发病率较高，是一种严重影响妇女身心健康甚至危及生命的最常见的恶性肿瘤之一。

乳腺癌是一种高度异质性的肿瘤，传统的病理形态学分型在目前的临床实践中已逐渐显示出其不完善性。随着人类分子生物学技术的应用，以肿瘤形态学结合基因表达特征的分子分型概念已被学者们所认同。在实际的临床工作中，多数专家认为可根据免疫组化检测的ER、PR、HER2和Ki-67结果将乳腺癌划分为4个类型，这4种类型是Luminal A型、Luninal B型(包括Luminal B(HER2阴性)型和Luminal B(HER2阳性)型)、HER2过表达型和Basal-like型。各分子亚型基因表型及临床病理学特点如下：

病理形态相同的乳腺癌，由于分子遗传学改变，在分子水平上呈现高度异质，从而导致肿瘤的预后及对治疗的反应差别很大。而以基因表达谱为基础提出的乳腺癌基因分型，能更精确的反应肿瘤的生物学行为，判断预后，并有利于选择和研究更具针对性的个性化治疗方法。应根据每一位患者的分子分型及其他相关因素，制定个体化、系统性的治疗方案。目前临床上乳腺癌分子分型的检测靶标主要是雌激素受体1(ESR1)、孕激素受体(PGR)、人类表皮生长因子受体2(ERBB2)、增殖标志物KI-67(MKI67)，检测主要三种方法：免疫组织化学法、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法。免疫组织化学法(IHC)目前是判定乳腺癌分型的重要手段，但是其耗时长、对实验操作要求高，而且结果的判定人为主观性比较强。蛋白免疫印迹法则敏感度偏低。

近年来，乳腺癌的诊断、分期、治疗选择和预后判断等已由组织病理学、细胞病理学进入分子病理学阶段，将乳腺癌组织中提取mRNA，采用逆转录酶反转录成cDNA，再以cDNA为模板，进行PCR扩增，得到目的基因的表达。

荧光核酸PCR技术具有敏感性高，检测快速等优点，然而，传统的荧光实时PCR每次只能扩增一种基因分子，检测多种基因要多次尝试，耗费大量的时间和精力。新型的多重实时荧光PCR可以有效弥补单重PCR的这些缺陷，是一种非常有应用前景的诊断方法。

应用RT-qPCR进行基因表达分析，需要表达稳定的内参基因对试验数据标准化，但有研究发现没有内参基因在所有试验条件下均可以“通用”，且使用单独内参基因会出现相对误差。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的是提供基于RNA分子标志物多重检测乳腺癌分型的组合物及试剂盒，解决了常规测序检测敏感度低的问题，避免了检测耗费大量时间精力和误差大的缺陷。