[发明专利]人纤维蛋白原单链的特异性shRNA、重组干扰载体及应用

说明书

本发明涉及人纤维蛋白原单链的特异性shRNA、重组干扰载体及应用，针对人纤维蛋白原的各单链设计特异性干扰RNA以及表达该shRNA的重组干扰载体，转染肿瘤细胞，敲低肿瘤细胞纤维蛋白原表达，增强肿瘤对化疗、靶向药物的敏感性。本发明的人纤维蛋白原shRNA，可以特异性降低纤维蛋白原水平，通过构建shRNA重组干扰载体，并进行慢病毒包装后，可以稳定干扰肿瘤细胞的纤维蛋白原表达。实验证明纤维蛋白原单链敲低可以增强不同肿瘤类型肿瘤(肾癌、卵巢癌、乳腺癌、肝癌、结肠癌、鼻咽癌、胃癌或肺癌)治疗敏感性，是增强肿瘤传统治疗敏感性的重要靶点。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及人纤维蛋白原单链的特异性shRNA、重组干扰载体及应用。

背景技术

人纤维蛋白原，也称人凝血因子I(Human coagulation factor I)是两个蛋白三聚体构成的聚合肽，由两组Aα、Bβ和γ蛋白肽链通过29个二硫键连接而成。三个单链蛋白分别由独立 mRNA转录，相关基因均位于第4号染色体长臂q23-q32，总长度为50kb，是一组不连续的单一拷贝基因。纤维蛋白原是一个大分子糖蛋白，通过细胞分泌释放到细胞周围。肿瘤患者，尤其是晚期肿瘤患者常呈现高纤维蛋白原血症。申请人前期的基础研究发现肿瘤细胞异位表达是血浆纤维蛋白原的重要来源。但是，肿瘤细胞表达纤维蛋白原单链呈现显著的不平衡，表明不同单链对肿瘤的进展有不同的作用。

作为肿瘤微环境的重要成分，纤维蛋白原在肿瘤进展中发挥了重要作用。通过检索 Medline、EMBASE、Cochrane文献，汇总分析和评估预血浆纤维蛋白原对肿瘤治疗效应的影响。既往报道的52项观察性研究和15371例患者的资料显示，高血浆纤维蛋白原与多种肿瘤治疗预后不良相关，包括肾细胞癌、头颈部癌、结直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、非小细胞肺癌等。理论研究推测，纤维蛋白原通过影响药物弥散，诱导肿瘤细胞休眠，封闭肿瘤抗原，调控信号传导等多种方式参与肿瘤的发生发展。但是，相关的分子机制尚处于初步研究中。

分子生物学技术可以特异性敲低某基因的表达水平。通过干扰RNA(siRNA)可以特异性阻断纤维蛋白原各单链的转录表达水平。通过进一步构建慢病毒，可以进一步提高肿瘤细胞的转染效率。但是，由于不同肿瘤细胞表达FGA、FGB和FGG水平的不均衡，其生物学功能也存在肿瘤类别差异。能否通过siRNA降低特异纤维蛋白原单链水平实现改善肿瘤的治疗效应的目的，目前尚未见相关报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供人纤维蛋白原单链的特异性shRNA、重组干扰载体及应用。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1、人纤维蛋白原单链的特异性shRNA，包含：

(1)shFGA：

Top：5'- CCGGGGAAGGCATTAACAGACATGCTTCAAGAGAGCATGTCTGTTAATGCCTTCCTTTTTT GGTACC-3'，如SEQ ID NO.1所示；

Bottom：5'- AATTGGTACCAAAAAAGGAAGGCATTAACAGACATGCTCTCTTGAAGCATGTCTGTTAA TGCCTTCC-3'，如SEQ ID NO.2所示；

(2)shFGB：

Top：

5'-CCGGGCACTGTCAGTTGCAATATTCTTCAAGAGAGAATATTGCAACTGACAGTGCTTTTTTGGTACC-3'，如SEQ ID NO.3所示；

Bottom：

5'- AATTGGTACCAAAAAAGCACTGTCAGTTGCAATATTCTCTCTTGAAGAATATTGCAACTGACAGTGC-3'，如SEQ ID NO.4所示；