[发明专利]胎盘间充质干细胞无血清培养基

说明书

本发明涉及干细胞技术领域，具体涉及一种胎盘间充质干细胞无血清培养基，其包括包括DMEM低糖培养基和补充剂，补充剂包括以下浓度的组分：人血清白蛋白1～5mg/mL、转铁蛋白5～10μg/mL、表皮细胞生长因子5～10ng/mL、转化生长因子10～30ng/mL、血小板衍生生长因子10～25ng/mL、谷胱甘肽1～5μg/mL、普鲁兰尼克F68 10～20μg/mL和木脂素5～10μg/mL。本发明制备的无血清培养基可以显著提高胎盘间充质干细胞的扩增能力，胎盘间充质干细胞存活率高，培养成本低，且缩短了细胞的培养时间，适用范围广，可用于工业化生产。

技术领域

本发明涉及干细胞技术领域，尤其是涉及一种胎盘间充质干细胞无血清培养基。

背景技术

胎盘间充质干细胞(MSC)，是一种多功能干细胞，具有强大的增殖能力和多向分化潜能的多潜能细胞。MSC在适宜的体内或体外环境下具有分化为：上皮干细胞、神经干细胞、肝干细胞，肌细胞、成骨细胞、软骨细胞、基质细胞等多种细胞的能力。MSC具有免疫调节作用，通过负性免疫调节功能，抑制机体亢进的免疫反应，使机体免疫功能恢复平衡，从而可以用来治疗造血干细胞移植之后的免疫排斥反应以及克隆氏病、红斑狼疮，硬皮病等自身免疫系统疾病。MSC是人体微环境的重要组成部分，移植间充质干细胞可以改变造血微环境，重建免疫系统，促进造血功能恢复，与造血干细胞共移植能显著提高白血病和难治性贫血等的治疗效果。近年来，胎盘间充质干细胞具有取材方便和数量多的优点，有利于间充质干细胞在科学研究和临床中的应用。

传统的间充质干细胞的培养方法是使用含有动物血清的培养基培养，主要是为了给间充质干细胞的生长繁殖提供养分如激素、生长因子、转运蛋白等，但是，血清是一种非常复杂的混合物，成分可能多达几百种，目前对其准确的成分、含量及其作用机制仍不清楚，血清各批次之间的质量差别较大，受到生产商原料来源地的影响较大，要保证每批的一致性很困难，不利于实验室研究或产品生产的标准化，血清中可能含有一些未知的或未检测出的支原体、病毒等有害微生物，对细胞产生潜在的影响，并且血清中存在的一些抗体、补体及细菌毒素等物质，也对细胞的生长产生不利影响，甚至造成细胞的死亡。

中国专利申请CN201911219419.5公开了一种无血清培养基及其制备方法，培养基包括了非必需氨基酸、谷氨酰胺、氢化可的松、地塞米松，聚乙烯醇、重组人胰岛素，重组人转铁蛋白、重组人表皮生长因子、重组碱性成纤维细胞生长因子等，该培养基包括了20多种组分，成本昂贵，并且该无血清培养基仅仅适合某一类的细胞培养，适用范围小，因此，还有改进的空间。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的之一是提供一种胎盘间充质干细胞无血清培养基，显著提高胎盘间充质干细胞的扩增能力，胎盘间充质干细胞存活率高，培养成本低，且缩短了细胞的培养时间，适用范围广，可用于工业化生产。

本发明的上述发明目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种胎盘间充质干细胞无血清培养基，包括DMEM低糖培养基和补充剂，所述补充剂包括以下浓度的组分：人血清白蛋白1～5mg/mL、转铁蛋白5～10μg/mL、表皮细胞生长因子5～10ng/mL、转化生长因子10～30ng/mL、血小板衍生生长因子10～25ng/mL、谷胱甘肽1～5μg/mL、普鲁兰尼克F68 10～20μg/mL和木脂素5～10μg/mL。

进一步地，所述DMEM低糖培养基和补充剂的质量比为5～8:1。

进一步地，所述补充剂包括以下浓度的组分：人血清白蛋白1～4mg/mL、转铁蛋白5～8μg/mL、表皮细胞生长因子5～9ng/mL、转化生长因子10～25ng/mL、血小板衍生生长因子10～20ng/mL、谷胱甘肽1～4μg/mL、普鲁兰尼克F68 15～20μg/mL和木脂素5～8μg/mL。