[发明专利]细胞抗逆基因片段及改造的HepG2细胞

说明书

本发明公开了一种细胞抗逆基因片段及改造的HepG2细胞，其中细胞抗逆基因片段，由CPS1、OATP1B3两种基因片段顺序构成。以该基因片段改造的HepG2细胞，促细胞生长因子ALR分泌增加5％，肝细胞生长因子HGF分泌增加一倍，反应到促肝损伤后恢复速度提高10倍，细胞抗逆能力大大提升。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地指一种细胞抗逆基因片段及改造的HepG2细胞。

背景技术

HepG2细胞是一种肝癌细胞。该细胞分泌多种血浆蛋白：清蛋白、α2-巨球蛋白、血纤维蛋白溶酶原、铁传递蛋白等。

现有HepG2细胞用做血液净化时，在高浓度的毒素血浆的环境下中容易出细胞核扩散，细胞会出现脱水凋亡的缺陷。

发明内容

本发明的目的在于克服现有HepG2细胞的缺陷，提供一种细胞抗逆基因片段及改造的HepG2细胞。

为实现上述目的，本发明首先提供了一种细胞抗逆基因片段，由CPS1、OATP1B3两种基因片段顺序构成，其中，各基因所对应分泌的蛋白如下：

CPS1为氨甲酰磷酸合成酶1；

OATP1B3为有机阴离子转运多肽1B3；

所述细胞抗逆基因片段用于HepG2细胞基因改造。

优选地，所述CPS1-OATP1B3的序列如SEQ No.1所示。

本发明还提供了一种细胞抗逆基因表达质粒，上述细胞抗逆基因片段。

优选地，所述质粒还包括氨基糖苷类抗生素筛选压力基因片段，所述氨基糖苷类抗生素筛选压力基因片段连接于所述细胞抗逆基因片段的3’端。

进一步优选地，所述质粒还包括启动子片段pTBSCH3，位于述细胞抗逆基因片段的5’端。

更进一步优选地，所述质粒的序列如SEQ No.2所示。

本发明还提供了一种包含细胞抗逆基因的HepG2细胞，包含上述功能片段，或利用上述的质粒改造HepG2细胞后获得。

本发明中改造HepG2细胞采用的质粒包含的功能基因为：pTBSCH3-CPS1-OATP1B3-G418,如SEQ No.2所示，由多基因顺序连而成，CPS1细胞增殖有关并且是尿素循环及其关键酶，OATP1B3为跨膜转运蛋白家族的重要成员之一；G418为氨基糖苷类抗生素筛选压力。

通过基因工程改造获得了HepG2-c细胞，相对于一代HepG2细胞，促细胞生长因子ALR分泌增加5％，肝细胞生长因子HGF分泌增加一倍，反应到促肝损伤后恢复速度提高10倍，细胞抗逆能力大大提升。

从现有研究文献我们可以看到，没有证据显示针对CPS1和OATP1B3的改造直接能获得本发明的结果。参考文献如下：

Understanding Carbamoyl-phosphate Synthetase I(CPS1)Deficiency byUsing Expression Studies and Structure-Based Analysis[HUMAN MUTATION,Vol.31,No.7,801–808,2010]Targeting CPS1 in the treatment of Carbamoyl phosphatesynthetase 1(CPS1)deficiency,a urea cycle disorder[Expert Opin TherTargets.2017Apr,21(4):391-399.]