[发明专利]人源化CCR2基因改造动物模型的构建方法及其应用

权利要求书

1.一种人源化CCR2基因改造动物细胞的构建方法，其特征在于，所述构建方法具体包括：提供人CCR2基因同源重组载体、sgRNA以及Cas9的混合物，所述Cas9包括Cas9 mRNA和/或Cas9蛋白，将所述混合物注射到小鼠受精卵细胞中，将所述小鼠受精卵细胞转移至培养液中进行培养；

所述人CCR2基因同源重组载体包括从5’端到3’端依次排列的5’同源臂、人CCR2基因编码区以及3’同源臂，所述5’同源臂为与小鼠Ccr2基因的第3号外显子5’端同源的DNA片段，所述3’同源臂为与小鼠Ccr2基因的第3号外显子3’端同源的DNA片段；

所述5’同源臂的DNA序列如SEQ ID NO：9所示，所述3’同源臂的DNA序列如SEQ ID NO：10所示，所述人CCR2基因编码区的DNA序列如SEQ ID NO：11所示；

所述sgRNA在小鼠Ccr2基因的5’端靶位点和3’端靶位点均位于小鼠Ccr2基因的第3号外显子上；

所述sgRNA靶向的5’端靶位点的序列如SEQ ID NO：21所示，所述sgRNA靶向的3’端靶位点的序列如SEQ ID NO：35所示。

2.一种人源化CCR2基因改造动物模型的构建方法，其特征在于，将如权利要求1所述的人源化CCR2基因改造动物细胞的构建方法得到的小鼠细胞移植至代孕母体内进行发育，得到F0代动物；

对F0代动物进行检验，获得基因型鉴定正确的F0代阳性动物。

3.如权利要求2所述的人源化CCR2基因改造动物模型的构建方法，其特征在于，还包括：将所述F0代阳性动物通过杂交和自交的方式，扩大种群数量，同时杂合子小鼠自交获得纯合子小鼠，建立稳定的人源化CCR2基因改造小鼠品系。

4.如权利要求2-3中任一项所述的人源化CCR2基因改造动物模型的构建方法获得的人源化CCR2基因改造动物模型、来源于所述人源化CCR2基因改造动物模型的细胞、细胞系或细胞培养物、组织、器官在与人CCR2基因或蛋白相关的应用；

所述应用包括人CCR2基因功能研究、人CCR2抗体研究、针对人CCR2靶位点的药物制备和药效研究中的至少一种。