[发明专利]一种基于复合微单倍型焦磷酸测序图谱解析的法医学混合DNA的分析方法

权利要求书

1.一种基于复合微单倍型焦磷酸测序图谱解析的法医学混合DNA的分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取样本的DNA，得到样本DNA；

2)对所述步骤1)得到的样本DNA进行荧光定量，得到定量样本DNA，将所述定量样本DNA进行PCR，得到PCR产物；

3)对所述步骤2)得到的PCR产物进行焦磷酸测序，分别得到每个微单倍型的基因分型结果；

4)使用AdvISER-M-PYRO算法对步骤3)得到的每个微单倍型的基因分型结果进行解析，得到微单倍型的基因分型结果、贡献者构成、贡献系数和相关系数；

5)使用支持向量机算法对步骤3)得到的微单倍型的基因分型结果进行分类，得到每个微单倍型的基因分型构成，得到每个混合DNA的贡献者构成；

所述步骤2)PCR使用的引物包括SEQ ID No.1～8所示的核苷酸序列；所述SEQ ID No.1～2扩增微单倍型mh03ZJ-001；所述SEQ ID No.3～4扩增微单倍型mh06ZJ-001；所述SEQ IDNo.5～6扩增微单倍型mh07ZJ-001；所述SEQ ID No.7～8扩增微单倍型mh19ZJ-001；

所述步骤3)焦磷酸测序使用的引物包括SEQ ID No.9～12所示的核苷酸序列；所述SEQID No.9测序微单倍型mh03ZJ-001；所述SEQ ID No.10测序微单倍型mh06ZJ-001；所述SEQID No.11测序微单倍型mh07ZJ-001；所述SEQ ID No.12测序微单倍型mh19ZJ-001。

2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述步骤3)焦磷酸测序，当所述PCR产物中仅含有微单倍型mh03ZJ-001时，所述焦磷酸测序的体系每50μl包括：2×GoTaqColorless Master Mix 25μl、浓度为10μM的SEQ ID No.91.2μl、无核酸酶水21.8μl和浓度为5ng/μL的PCR产物2μl。

3.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述步骤3)焦磷酸测序，当所述PCR产物中仅含有微单倍型mh06ZJ-001时，所述焦磷酸测序的体系每50μl包括：2×GoTaqColorless Master Mix 25μl、浓度为10μM的SEQ ID No.101μl、无核酸酶水22μl和浓度为5ng/μL的PCR产物2μl。

4.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述步骤3)焦磷酸测序，当所述PCR产物中仅含有微单倍型mh07ZJ-001时，所述焦磷酸测序的体系每50μl包括：2×GoTaqColorless Master Mix 25μl、浓度为10μM的SEQ ID No.111.4μl、无核酸酶水21.6μl和浓度为5ng/μL的PCR产物2μl。

5.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述步骤3)焦磷酸测序，当所述PCR产物中仅含有微单倍型mh19ZJ-001时，所述焦磷酸测序的体系每50μl包括：2×GoTaqColorless Master Mix 25μl、浓度为10μM的SEQ ID No.120.8μl、无核酸酶水22.2μl和浓度为5ng/μL的PCR产物2μl。

6.根据权利要求2～5任一项所述的分析方法，其特征在于，制备焦磷酸测序使用的模板的程序为：预变性95℃2min；Touchdown阶段95℃30s，71℃45s，72℃30s，20个循环，每一个循环71℃下降0.5℃；循环扩增阶段95℃30s，61℃45s，72℃30s，25个循环；终延伸72℃5min。