[发明专利]过氧化物转录抑制因子突变体、突变基因及其在制备维生素B2中的应用

说明书

本发明公开了一种过氧化物转录抑制因子突变体、突变基因及其在制备维生素B₂中的应用。其中所述突变体的氨基酸序列相对于SEQ ID No.3所示序列存在下述突变：第71位氨基酸替换为V。对枯草芽孢杆菌染色体上的过氧化物转录抑制因子基因中第71位氨基酸编码核苷酸进行定点突变而编码氨基酸V，而获得的基因工程菌，其生产维生素B₂的能力得到了较大幅度的提升，并且对菌的生长有利，因而具有较大的应用推广价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及过氧化物转录抑制因子的突变体，其基因工程菌，以及在制备维生素B₂中的应用。

背景技术

核黄素（Riboflavin）又称维生素B₂，分子式为C₁₇H₂₀O₆N₄，是维生素B族中的一种水溶性维生素，在生物体内以黄素单核苷酸（FMN）和黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）两种形式存在，作为机体内一些重要的氧化还原酶的辅酶参与氧化还原反应，起到递氢的作用。核黄素的缺乏会导致生物体代谢发生障碍，但人和动物均不能自身合成，只能从食物中摄取，因此核黄素的生产在食品、饲料以及医药行业都具有非常广阔的市场。

目前核黄素的工业生产方法有植物萃取法、化学合成法、半合成法以及微生物合成法。其中，微生物合成法以其成本低、环境友好以及能源可再生等优点逐步占据主导地位，成为大部分工业化生产的主要方法。在众多可生产核黄素的微生物中，枯草芽孢杆菌（B.subtilis）作为一种非病原微生物，生理代谢及遗传背景清楚，便于确定代谢靶点及基因工程改造，并具有可靠的安全性，它们的发酵产物在食品与饲料业中已有长期的应用，对环境、医药和工业发酵生产都非常重要。其次枯草芽孢杆菌基因工程菌株能够过量合成叶酸、肌苷或鸟苷，具有为核黄素过量合成提供足够前体物的潜力，因此枯草芽孢杆菌基因工程菌在核黄素的微生物发酵生产中逐渐显示出了强大的生命力，成为主要生产菌株。

枯草芽孢杆菌（B.subtilis）中核黄素的合成需要5-磷酸核酮糖（Ru5P）和鸟嘌呤-5’ -三磷酸（GTP）两个前体物质，其中Ru5P来源于磷酸戊糖途径，GTP来源于嘌呤的从头合成途径。最终5-磷酸核酮糖和GTP在核黄素操纵子编码的酶的催化下经过7步反应生成核黄素。