[发明专利]用于通过液相色谱法优化缓冲条件的方法和系统

权利要求书

1. 一种使用盐梯度通过色谱柱确定用于分析生物分子的缓冲条件的方法，所述方法包括：

A）分别使用具有第一恒定pH值、第二恒定pH值和第三恒定pH值的流动相进行第一盐梯度色谱运行、第二盐梯度色谱运行和第三盐梯度色谱运行以分析生物分子，其中具有所述第一恒定pH值、所述第二恒定pH值和所述第三恒定pH值的所述流动相是分别用第一预定比例、第二预定比例和第三预定比例的第一洗脱溶液和第二洗脱溶液制备的，其中所述第一预定比例、所述第二预定比例和所述第三预定比例是不同的，其中所述第一盐梯度色谱运行、所述第二盐梯度色谱运行和所述第三盐梯度色谱运行各自使用相同的盐梯度浓度范围、相同的梯度时间和相同的盐梯度浓度变化率，其中

a）所述第一洗脱溶液包括至少四种缓冲盐，其中所述四种缓冲盐中的至少三种缓冲盐是单价缓冲盐，其在6到10的pH范围内具有净负电荷或净中性两性离子电荷，并且包含磺酸根基团和胺，其中所述第一洗脱溶液具有为6的第一pH，

b）所述第二洗脱溶液包括至少四种缓冲盐，其中所述四种缓冲盐中的至少三种缓冲盐是单价缓冲盐，在6到10的pH范围内具有净负电荷或净中性两性离子电荷，并且包含磺酸根基团和胺，其中所述第二洗脱溶液具有为10的第二pH ；

B）在所述第一盐梯度色谱运行、所述第二盐梯度色谱运行和所述第三盐梯度色谱运行中的每个盐梯度色谱运行期间测量一个或多个峰；以及

C）对所述第一盐梯度色谱运行、所述第二盐梯度色谱运行和所述第三盐梯度色谱运行的测得的一个或多个峰进行色谱优化算法，以从所述第一盐梯度色谱运行、所述第二盐梯度色谱运行和所述第三盐梯度色谱运行中鉴定至少一个优化的盐梯度色谱运行，

其中所述进行所述色谱优化算法从所述第一盐梯度色谱运行、所述第二盐梯度色谱运行和所述第三盐梯度色谱运行中鉴定至少一个优化的盐梯度色谱运行，其中所述色谱优化算法包括：

a）峰总数算法，所述峰总数算法包括：

a1）统计所述第一盐梯度色谱运行、所述第二盐梯度色谱运行和所述第三盐梯度色谱运行中的每个盐梯度色谱运行所测得的峰的总数；以及

a2）将所述第一盐梯度色谱运行、所述第二盐梯度色谱运行和所述第三盐梯度色谱运行中的至少一个盐梯度色谱运行鉴定为具有最大的峰总数；

b）峰谷算法，所述峰谷算法包括：

b1）计算所述第一盐梯度色谱运行、所述第二盐梯度色谱运行和所述第三盐梯度色谱运行中的每个盐梯度色谱运行的前一峰谷比，所述计算所述前一峰谷比包括：

i）鉴定所述第一盐梯度色谱运行、所述第二盐梯度色谱运行和所述第三盐梯度色谱运行中的每个盐梯度色谱运行的具有主峰保留时间的主峰，其中所述主峰的主峰高度与检测到的信号的最高绝对量值相对应；

ii）鉴定所述第一盐梯度色谱运行、所述第二盐梯度色谱运行和所述第三盐梯度色谱运行中的每个盐梯度色谱运行的具有前一峰保留时间和前一峰高度的前一峰，其中所述前一峰与所述主峰相邻，并且所述前一峰保留时间小于所述主峰保留时间；

iii）鉴定所述第一盐梯度色谱运行、所述第二盐梯度色谱运行和所述第三盐梯度色谱运行中的每个盐梯度色谱运行的具有前一谷保留时间和前一谷高度的前一谷，其中所述前一谷位于所述主峰与所述前一峰之间；以及

iv）将所述主峰高度除以所述前一谷高度以形成所述第一盐梯度色谱运行、所述第二盐梯度色谱运行和所述第三盐梯度色谱运行中的每个盐梯度色谱运行的前一峰谷比；

b2）计算所述第一盐梯度色谱运行、所述第二盐梯度色谱运行和所述第三盐梯度色谱运行中的每个盐梯度色谱运行的后一峰谷比，所述计算所述后一峰谷比包括：

i）鉴定所述第一盐梯度色谱运行、所述第二盐梯度色谱运行和所述第三盐梯度色谱运行中的每个盐梯度色谱运行的具有后一峰保留时间和后一峰高度的后一峰，其中所述后一峰与所述主峰相邻，并且所述后一峰保留时间大于所述主峰保留时间；以及

ii）鉴定所述第一盐梯度色谱运行、所述第二盐梯度色谱运行和所述第三盐梯度色谱运行中的每个盐梯度色谱运行的具有后一谷保留时间和后一谷高度的后一谷，其中所述后一谷位于所述主峰与所述后一峰之间；

iii）将所述主峰高度除以所述后一谷高度以形成所述第一盐梯度色谱运行、所述第二盐梯度色谱运行和所述第三盐梯度色谱运行中的每个盐梯度色谱运行的后一峰谷比；

b3）将所述第一盐梯度色谱运行、所述第二盐梯度色谱运行和所述第三盐梯度色谱运行中的每个盐梯度色谱运行的所述前一峰谷比分别乘以所述第一盐梯度色谱运行、所述第二盐梯度色谱运行和所述第三盐梯度色谱运行中的每个盐梯度色谱运行的所述后一峰谷比，以形成所述第一盐梯度色谱运行、所述第二盐梯度色谱运行和所述第三盐梯度色谱运行中的每个盐梯度色谱运行的乘积；

b4）计算所述第一盐梯度色谱运行、所述第二盐梯度色谱运行和所述第三盐梯度色谱运行中的每个盐梯度色谱运行的所述乘积的平方根，以形成所述第一盐梯度色谱运行、所述第二盐梯度色谱运行和所述第三盐梯度色谱运行中的每个盐梯度色谱运行的复合峰谷比；以及

b5）将所述第一盐梯度色谱运行、所述第二盐梯度色谱运行和所述第三盐梯度色谱运行中的至少一个盐梯度色谱运行鉴定为具有最大复合峰谷比；以及

c）峰容量算法，所述峰容量算法包括：

c1）基于一方程式计算所述第一盐梯度色谱运行、所述第二盐梯度色谱运行和所述第三盐梯度色谱运行中的每个盐梯度色谱运行的峰容量，所述方程式包括：，其中n'是所述峰容量，t_g是梯度时间，PWHH_M是所述主峰的半高峰宽；以及

c2）将所述第一盐梯度色谱运行、所述第二盐梯度色谱运行和所述第三盐梯度色谱运行中的至少一个盐梯度色谱运行鉴定为具有最大峰容量，

其中所述进行所述色谱优化算法基于以下从所述第一盐梯度色谱运行、所述第二盐梯度色谱运行和所述第三盐梯度色谱运行中鉴定至少一个优化的盐梯度色谱运行：a）所述峰总数算法，b）所述峰谷算法，以及c）所述峰容量算法。