[发明专利]蛋白质沉淀剂及其应用

说明书

本发明公开了一种蛋白质沉淀剂及其应用。该蛋白质沉淀剂包括聚丙烯酰胺，及其在有机磷检测中的应用。在有机磷检测过程中的显色反应前，加入聚丙烯酰胺能有效地进行蛋白质的沉淀，使得有机磷的检测结果更加稳定和有效。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别涉及一种蛋白质沉淀剂及其应用。

背景技术

常用的植物性饲料中磷是以植酸磷形式存在的，很难被猪等单胃动物消化利用，大部分随粪便排出体外而损失。在饲料中一般添加外源植酸酶来降解饲料中的植酸磷，增加饲料中磷的消化率。评价植酸酶对植酸磷消化率影响的一般方法为体外模拟，目前常用的体外模拟方法通常为透析法，参照liu等(1997)Zyta等(1999)建立的胃蛋白酶和胰蛋白酶两步透析袋法：

1)胃蛋白酶消化期：准确称取1.0g待测饲料样品，每组试验设4个重复，放入10ml玻璃试管中，加入不同浓度植酸酶酶液，再加入2ml浓度为2000NFU/ml的胃蛋白酶溶液，用0.5mol盐酸溶液调节pH至2.5，将食糜混合均匀后，封口放入35℃的恒温水浴振荡器内消化100min(放入5min后开始计时)。

2)胰蛋白酶消化期：采用半透膜透析法，将经过胃蛋白酶消化后的食糜用1mol的碳酸氢钠调至pH值为6.5，加入0.5ml浓度为0.65mg/kg的胰蛋白酶溶液，混合均匀，为了使样品无损失转入透析袋中，用10mlpH值为6.5的巴比妥钠缓冲溶液冲洗试管5次，将冲洗液倒入透析袋，扎紧透析袋。然后将透析袋放入盛有100ml巴比妥钠缓冲溶液的三角瓶中，密封后于35℃的恒温振荡器中振荡(120-180r/min)透析6h。

3)显色：取透析溶液1mL到25mL容量瓶中，加入显色液5mL，混匀，用蒸馏水定容，显色10分钟。

然而上述方法却存在如下问题：

1、上述方法将体内连续的两个反应阶段人为划分成两个单独阶段，中间增加了转移的步骤，中断了反应的连续性、增加人为误差、整个操作过程繁琐。

2、猪体温约为39℃，鸡体温约为41℃，本方法反应温度为35℃，温度偏低，与实际情况不符。

3、根据实验结果，外源植酸酶反应最佳pH值范围为2.0-6.0，当pH6.5时酶反应较弱，不能反应真实情况，胃蛋白酶反应阶段到胰蛋白酶反应阶段是pH逐渐变化过程，在十二指肠前、中段pH约为5.5，这个阶段(约4h)已经足够外源植酸酶发挥作用。

4、酶解后的透析液在磷含量测定时，显色反应会生成浑浊的悬浮物，离心后仍然未能完全去除悬浮物，导致比色结果不稳定，不准确的情况。

发明内容

本发明的目的是提供一种蛋白质沉淀剂及其应用，以解决上述问题。

根据本发明的一个方面，提供了一种蛋白质沉淀剂，该沉淀剂包括聚丙烯酰胺或包括聚丙烯酰胺的组合物。由此，聚丙烯酰胺通过电荷的絮凝作用可以有效地进行蛋白质的沉淀。

在某些实施方式中，作为蛋白沉淀剂的聚丙烯酰胺浓度为0.1％。由此，可以达到较好的蛋白质沉淀效果。

根据本发明的另一个方面，提供了一种蛋白质沉淀剂在有机磷检测中的应用。由此，可以大大增加有机磷检测试验的准确性。

在某些实施方式中，在有机磷检测中的蛋白质沉淀剂包括聚丙烯酰胺或包括聚丙烯酰胺的组合物；或浓度为0.1％的聚丙烯酰胺。由此，可以大大增加有机磷检测试验的准确性。

在某些实施方式中，有机磷检测优选地为植酸磷检测。由此，可以大大增加植酸磷检测试验的准确性。

在某些实施方式中，植酸磷的检测包括如下步骤：