[发明专利]小鼠短串联重复序列的多重扩增体系及检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种小鼠短串联重复序列的多重扩增体系，该多重扩增体系中包含18对引物，可同时扩增18个小鼠的STR位点。本发明还包括由所述多重扩增体系构成的检测试剂盒。本发明所述多重扩增体系通过一次扩增即可获得大量信息；扩增产物带有荧光，可直接在测序仪上进行检测，结果准确，重复性高，数据可建立标准参考数据库；操作简便，需时短，易于规模化及自动化。

技术领域

本发明涉及生物技术检测领域，尤其涉及小鼠短串联重复序列的多重扩增体系及检测试剂盒。

背景技术

从第一株实验室培养的细胞系诞生后不久，就一直有关于细胞系交叉污染问题的文章及报道。曾有文献作者根据检测结果估算，全球在用的细胞系有高达20％至33％是被错误标记或辨识。从2015年开始，多家科学界权威杂志社陆续要求撰稿人需要对所使用的细胞系提供鉴定报告，以证明所使用的细胞系没有交叉污染或被错误标记。之后，细胞系交叉污染问题才得到广大科研工作人员的重视。近来，使用错误细胞系的情况虽有所改善，但仅仅是对于人源细胞系而言；对于其他种属的细胞，因为没有统一的数据库或没有稳定的检测体系等，情况一直没有很大的改善。而大量的未经鉴定的非人源细胞系的使用，同样会造成科研时间和经费的浪费，同时也会导致错误结论或误导其他科研人员。

短串联重复序列(STR)检测已广泛应用于亲缘鉴定、法医鉴定等检测中；而且在人源细胞系的鉴定中也非常成熟，并已建立起了统一的STR位点信息数据库，可供广大科研人员查询和比对。

小鼠细胞系是除人源细胞系外使用最多的一类细胞系。虽然小鼠已有全基因组序列，但仍没有一个标准的STR Marker组合和标准数据库可以检索。

在2016年，专利CN105648100A，更新了小鼠短串联重复序列的复合扩增体系及检测试剂盒，包含9个位点和一个性别判定位点。但9个位点所能提供的分辨率对于数量庞大的小鼠个体来说是远远不够的，并不确保能把每只小鼠个体区分开来。这对小鼠细胞系及小鼠个体的鉴定来说都是不利的，亟需开发针对更多位点的小鼠短串联重复序列多重扩增体系及检测试剂盒。

发明内容

本发明的目的是为了解决上述现有技术的缺点和不足，提供一种小鼠短串联重复序列的多重扩增体系及检测试剂盒，通过鉴定小鼠的STR位点来鉴定小鼠细胞系。

本发明是通过以下技术方案来实现的：

一种小鼠短串联重复序列的多重扩增体系，包含18对引物，可同时扩增18个小鼠的STR位点Mmus-1、Mmus-2、Mmus-3、Mmus-4、Mmus-5、Mmus-6、Mmus-7、Mmus-8、Mmus-9、Mmus-10、Mmus-11、Mmus-12、Mmus-13、Mmus-14、Mmus-15、Mmus-16、Mmus-17、Mmus-18；所述引物分别为:

扩增Mmus-1的上游引物：AGCTATCAGAGATGCCCCCT(SEQ ID NO:1)；

扩增Mmus-1的下游引物：GACAGATAGTGAACTCTAGG(SEQ ID NO:2)；

扩增Mmus-2的上游引物：CTACAGTCTTTCTGTCTTT(SEQ ID NO:3)；

扩增Mmus-2的下游引物：GGACTTTGGGGGGGAGGTT(SEQ ID NO:4)；

扩增Mmus-3的上游引物：CTTTGCTGGAAAGAGAAAGAG(SEQ ID NO:5)；

扩增Mmus-3的下游引物：CATTCTAAAGTTCCTGCTTAGC(SEQ ID NO:6)；

扩增Mmus-4的上游引物：GGAGTTACAGATAGTTGTGAGC(SEQ ID NO:7)；