[发明专利]一种橄榄叶中苦苷和羟基酪醇含量的快速检测方法

说明书

本发明公开了一种橄榄叶中苦苷和羟基酪醇含量的快速检测方法，通过将橄榄叶粉末与甲醇的水溶液混合提取，离心取上清液过滤备用，确定流动相和梯度洗脱程序，将待测样品液体进样，设定检测条件，与标准品进行比较而获得的提取物中羟基酪醇和苦苷的含量。本发明方法检测不同储存和干燥条件下橄榄叶中苦苷和羟基酪醇重复性好，稳定性强，且ZORBAX SB‑C18反相色谱柱低成本具有实验室通用性，可以广泛推广使用。

技术领域

本发明属于天然物检测技术领域，具体涉及一种橄榄叶中苦苷和羟基酪醇含量的快速检测方法。

背景技术

油橄榄(Olea europaeaL.)作为一种经济作物，起初主要种植在地中海沿岸的希腊、意大利等国，后引入我国，主要分布在云南、四川、甘肃、贵州等地。橄榄叶是橄榄种植业的主要副产品，每年在修剪和收获水果时都会被丢弃。这不仅污染环境，还会造成资源的严重浪费。因此，对油橄榄叶进行综合利用开发，是十分必要的。

油橄榄叶中活性物质主要有多酚类、黄酮类、裂环烯醚萜类、双黄酮等，其中橄榄苦苷(Oleuropein，OLE)和羟基酪醇(Hydroxytyrosol，HT)是两种主要的多酚类化合物。根据文献报道，橄榄苦苷和羟基酪醇具有良好的抗氧化作用，可以有效的清除自由基，被认为是天然的抗氧剂之一。此外，橄榄苦苷还具有抗真菌、抗病毒、抗癌和降血糖的作用；羟基酪醇具有预防动脉硬化、高血压、脑溢血，降血压、抗癌防癌等作用。因此，含有橄榄苦苷和羟基酪醇的提取物有望成为保健品、药品、化妆品的新原料。

橄榄苦苷和羟基酪醇具有广泛的药理活性，是鲜橄榄叶中酚类化合物，但因羟基酪醇含量少，二者很难被HPLC方法高效检测。目前，常见HPLC方法中流动相组成为两种或三种，梯度洗脱程序复杂，检测时间长。因此，提供一种时间短、稳定性强的检测方法非常具有必要性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种橄榄叶中苦苷和羟基酪醇含量的快速检测方法，该方法在HPLC检测技术上进行优化，新的优化HPLC检测方法流动相成分改为(水和乙腈)，缩短总检测时间仅为35min，且羟基酪醇周围无杂峰出现。该方法检测不同储存和干燥条件下橄榄叶中橄榄苦苷和羟基酪醇重复性好，稳定性强，且ZORBAXSB-C18反相色谱柱低成本具有实验室通用性，可以广泛推广使用。

本发明的技术目的具体通过以下技术方案实现：

一种橄榄叶中苦苷和羟基酪醇含量的快速检测方法，通过将橄榄叶粉末与甲醇的水溶液混合提取，离心取上清液过滤备用，确定流动相和梯度洗脱程序，将待测样品液体进样，设定检测条件，与标准品进行比较而获得的提取物中羟基酪醇和苦苷的含量。

所述的甲醇的水溶液中甲醇的体积浓度为78％。

所述的橄榄叶粉末与甲醇水溶液的质量体积比为1:50g/mL。

所述的流动相为水(A)-乙腈(B)，所述的梯度洗脱程序为：0-10min，90％A-10％B；14-15min，80％A-20％B；30min，90％A-10％B。

所述的检测条件为：流速0.8mL/min，色谱柱为ZORBAXSB-C18，柱温30℃，进样量为10μL，检测波长为280nm。

本发明的有益效果为：

1)羟基酪醇的得出峰时间为29.3min，与其他方法相比时间至少缩短了10min。

2)橄榄叶中羟基酪醇含量低，且受储存和干燥条件影响容易降解，不能被HPLC检测到。该方法不仅同时检测到不同储备条件下(-20℃、4℃及室温)羟基酪醇和橄榄苦苷信号，也能检测到不同干燥条件(冻干、常温晾干、70℃)下二者信号，说明该方法灵敏度高，稳定性强。

3)该方法用的ZORBAXSB-C18反相色谱柱低成本，具有广泛性。

附图说明