[发明专利]基于超高效液相串联高分辨质谱的早期阿尔茨海默病鼠脂质组学分析方法及应用

权利要求书

1.一种基于超高效液相串联高分辨质谱的早期阿尔茨海默病模型鼠的脂质组学分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，对收集到的阿尔茨海默病模型鼠血浆/血清和/或动物脑组织用丁醇-甲醇、正庚烷-乙酸乙酯和乙酸铵水溶液进行提取，涡流、离心，得到上层有机溶液；

步骤2，将所述的上层有机溶液，真空干燥有机溶剂，浓缩样品，进而用乙腈-水溶液去复溶浓缩后的样品，高速离心后得到待测上清进样；

步骤3，将所述待测样品通过UPLC色谱柱中的流动相洗脱进行分离后，然后分别在正、负离子模式下使用四极杆飞行时间高分辨质谱仪进行检测，根据目标磷脂类分子的化学式、精确分子量、二级碎片、丰度比，将检测数据与之比对，鉴定得到阿尔茨海默病早期不同阶段鼠血浆和脑多种磷脂分子。

步骤4，运用脂质组学相关数据库和分析软件，构建生物标志物的代谢通路并进行分析。

2.如权利要求1所述的早期阿尔茨海默病鼠为阿尔茨海默病鼠为APP/PS1双转基因鼠，且鼠龄分别为2、3和7月龄。

3.如权利要求1所述的基于超高效液相串联高分辨质谱的早期阿尔茨海默病鼠脂质组学分析方法，其特征在于，步骤1中，丁醇-甲醇和正庚烷-乙酸乙酯提取液中的丁醇：甲醇：正庚烷：乙酸乙酯：乙酸铵水溶液体积比为(0.1-0.3):(0.05-0.2):(0.15-0.3):(0.05-0.2):(0.2-0.5)。其中，乙酸铵水的浓度为40-60mM。

4.如权利要求1所述的基于超高效液相串联高分辨质谱的早期阿尔茨海默病鼠脂质组学分析方法，其特征在于，步骤1中，涡流时间60秒，频率100HZ；超声频率为60HZ、功率200W，超声时间10min。

5.如权利要求1所述的基于超高效液相串联高分辨质谱的早期阿尔茨海默病鼠脂质组学分析方法，其特征在于，在步骤2中，离心机转速为12000-15000rpm。

6.如权利要求1所述的基于超高效液相串联高分辨质谱的早期阿尔茨海默病鼠脂质组学分析方法，其特征在于，在步骤2中，复溶浓缩后的样品的乙腈-水溶液中乙腈：水体积比为(3-4):(2-3)，使用体积为45-55μL。

7.如权利要求1所述的基于超高效液相串联高分辨质谱的早期阿尔茨海默病鼠脂质组学分析方法，其特征在于，步骤3中，所述UPLC色谱柱为为ACQUITY UPLC CSH C18色谱柱。

8.如权利要求1所述的脂质组学分析方法，其特征在于，步骤3中，所述待测样品通过色谱柱中的流动相洗脱的方式是利用流动相A和流动相B进行洗脱；

其中，所述流动相A包括乙腈和乙酸铵，所述乙腈为100％，乙酸铵的浓度为4.0-6.0mM；

所述流动相B包括异丙醇、乙腈以及乙酸铵，其中异丙醇：乙腈的体积比为(8-15)：(85-92)，所述乙酸铵的浓度为4.0-6.0mM。

9.如权利要求8所述的流动相洗脱的方式，其特征在于，色谱柱的使用条件为：将所述待测样品的进样体积设置为5μl，柱温55℃，流速0.4mL/min；梯度洗脱程序具体如下：0-2min，40％-43％B；2-4.1min，43％-45％B；4.1-12min，45％-48％B；12-12.1min，48％-60％B；12.1-18min,60％-100％B；18-18.1min,80％-40％B；18.1-20min,40％B。

10.如权利要求1所述的基于超高效液相串联高分辨质谱的早期阿尔茨海默病鼠脂质组学分析方法，其特征在于，使用四极杆飞行时间高分辨质谱仪进行测定的质谱条件为：电喷雾离子源先后采用正负离子化模式采集数据，负离子模式下：毛细管电压为-3.5kV，去簇电压-2.0kV，离子源温度为250℃，喷雾压力为2.0bar，干燥气流速6L/min，碰撞能量20-70eV；正离子模式下：毛细管电压为4.5kV，去簇电压2.0kV，离子源温度为250℃，喷雾压力为2.0bar，干燥气流速7L/min，碰撞能量70eV。