[发明专利]九项呼吸道病原体核酸标记试剂盒及使用方法

说明书

本申请涉及一种九项呼吸道病原体核酸标记试剂盒及使用方法，所述的核酸标记试剂盒包括与这9种呼吸道病原体核酸标记的引物对和探针。所述的核酸标记试剂盒的RT‑PCR扩增反应体系：临床模板或阴阳性质控模板：4.0μL、RT‑PCR扩增试剂混合物12.5μL、RT‑PCR扩增引物混合物7.5μL、RT‑PCR酶混合物1μL，总体积25.0μL。所述的核酸标记试剂盒的RT‑PCR扩增反应参数：50℃20min×1cycle；95℃5min×1cycle；(94℃20s，55℃30s，65℃30s)×35cycles；72℃3min×1cycle；12℃保存；等等。本申请采用荧光标记的方式，对疑似上述九项病原体核酸进行标记，所显示的荧光标记图谱可以为医学专家后期分析提供帮助。

技术领域

本申请属于核酸标记试剂盒内容技术领域，尤其是属于一种可以对疑似九项呼吸道病原 体核酸标记试剂盒内容技术领域，荧光标记后的结果可以为后期专家分析提供帮助。

背景技术

本申请2019-nCoV为2020年全球爆发的新型冠状病毒，H1N1为甲型流感病毒，H3N2为甲型流感病毒，IFV为乙型流感病毒，RSV-A为呼吸道合胞病毒A，RSV-B为呼吸道合胞 病毒B，HI为流感嗜血杆菌，SP为肺炎链球菌，MP为肺炎支原体。

2019新型冠状病毒(2019-nCoV)为一种属于β属的新型冠状病毒。冠状病毒有包膜，颗 粒呈圆形或椭圆形，经常为多形性，直径50～200nm。S蛋白位于病毒表面形成棒状结构， 作为病毒的主要抗原蛋白之一，是用于分型的主要基因。N蛋白包裹病毒基因组，可用作诊 断抗原。对冠状病毒理化特性的认识多来自对SARS-CoV和MERS-CoV的研究。病毒对热敏感，56℃30分钟、乙醚、75％乙醇、含氯消毒剂、过氧乙酸和氯仿等脂溶剂均可有效灭活病毒，氯己定不能有效灭活病毒。

流行性感冒病毒，简称流感病毒，是一种造成人类及动物患流行性感冒的RNA病毒， 属于正黏液病毒科。流感病毒侵袭的目标是呼吸道粘膜上皮细胞，感染后会造成急性上呼吸 道感染，是高度接触传染性的群发性呼吸道疾病，严重时可累积心肺等人体重要器官。

呼吸道合胞病毒是一种RNA病毒，属副粘液病毒科。该病经空气飞沫和密切接触传播。 多见于新生儿和6个月以内的婴儿。潜伏期3～7日。婴幼儿症状较重，可有高热、鼻炎、咽炎及喉炎，以后表现为细支气管炎及肺炎。

流感嗜血杆菌(学名Haemophilus influenzae)，它们会在寄主体内生存而不引起任何疾病， 但当某一些因素(如病毒感染或免疫力下降)出现后则会引发病症。流由流感嗜血杆菌自然 产生的疾病只会在人类出现。在婴儿及孩童中，乙型流感嗜血杆菌会引致菌血病症及急性细 菌性脑膜炎。偶尔地它会引 致蜂窝组织炎、骨髓炎及关节感染。

肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)简称肺炎球菌(pneumococcus)。1881年首次由 巴斯德(Louis Pasteur)及G.M.Sternberg分别在法国及美国从患者痰液中分离出。肺炎链 球菌在自然界中分布广泛，常生活在正常人的鼻腔中，多数不致病或致病力很弱，少数致病 力较强，肺炎链球菌主要引起大叶性肺炎以及气管炎、中耳炎、脑膜炎、胸膜炎、心内膜炎、 败血症等疾病。

肺炎支原体(M.Pneumonia)是人类支原体肺炎的病原体。支原体肺炎的病理改变以间质 性肺炎为主，有时并发支气管肺炎，称为原发性非典型性肺炎。主要经飞沫传染，潜伏期2～ 3周，发病率以青少年最高。临床症状较轻，甚至根本无症状，若有也只是头痛、咽痛、发 热、咳嗽等一般的呼吸道症状，但也有个别死亡报道。

由于上述病原体感染以发热、干咳、乏力为主要表现。少数患者有鼻塞、流涕、咽痛、 肌痛和腹泻的症状，和新型冠状的临床表现一致，目前暂无一次能同时对九项呼吸道病原体 核酸标记的试剂盒。

发明内容