[发明专利]一种IL7-Fc-GMCSF融合蛋白及其应用

说明书

本发明公开了一种IL7‑Fc‑GMCSF融合蛋白及其应用，所述融合蛋白为二聚体蛋白，包括二聚化的第一条多肽链和第二条多肽链，第一条多肽链的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，第二条多肽链的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。通过IL7和GMCSF刺激外周血淋巴细胞增殖的作用进行外周血淋巴细胞的体外培养。

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种IL7-Fc-GMCSF融合蛋白及其应用。

背景技术

IL7(interleukin7,白介素7)是白介素家族成员之一，为多潜能的细胞因子，主要由胸腺基质细胞产生，具有广泛的免疫效应，在T细胞生长、存活及分化中具有重要作用。IL7的主要功能是促进B细胞和T细胞生长及抗凋亡作用，是B细胞生长和preB细胞生存、分化、增殖因子。在T细胞发育、增殖及稳态调节中起关键作用。其效应细胞主要为CD8+亚群。IL7支持记忆CD8+T细胞稳态扩展和生存还可刺激外周血单核细胞的裂解活性。提高机体的免疫能力对于DC和NK细胞的产生有促进作用。

粒细胞-巨噬细胞集落因子(Granulocyte-macrophage colony stimulatingfactor，GMCSF)是一种细胞因子，可促进造血祖细胞分化为粒细胞、巨噬细胞，并且可以通过调节抗原递呈细胞(antigen presenting cells,APCs)尤其是树突状细胞的数量和功能来增强机体的免疫应答。GMCSF可通过增强特异性抗体应答和促进T细胞增殖增强机体的免疫反应。rhGM-CSF的生理作用十分广泛，一方面为刺激骨髓的造血功能，刺激粒细胞、树突细胞、单核细胞、T细胞的增殖，并能促进单核细胞和粒细胞的成熟另一方面促进单核巨噬细胞与中性粒细胞释放大量的细胞因子参与机体的免疫调节，促进中性粒细胞的粘附因子的表达。因此，rhGM-CSF可通过刺激DC细胞的增殖，增强其抗原提呈功能，促进其与淋巴细胞结合，促进淋巴细胞的增殖及分化，进而促进免疫应答的发生；同时，可直接刺激T细胞的增殖，促进免疫应答的发生。

抗体的Fc端，具有高稳定性，长效性，能够有效保证融合蛋白的活性同时增加融合蛋白的效用。

目前尚未见IL7-Fc-GMCSF融合蛋白及利用Knob-in-hole方式进行表达IL7-Fc-GMCSF融合蛋白的相关报道。

发明内容

为此，本发明了提供一种IL7-Fc-GMCSF融合蛋白和应用。

本发明采取的具体技术方案是：

本发明的第一方面提供了一种IL7-Fc-GMCSF融合蛋白，所述融合蛋白为二聚体蛋白，包括二聚化的第一条多肽链和第二条多肽链，第一条多肽链的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示，第二条多肽链的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

所述融合蛋白由Fc蛋白片段分别与IL7蛋白片段、GMCSF蛋白片段通过Knob-in-hole方式融合连接。

IL7蛋白片段来自人的IL7区域；Fc蛋白片段来自人IgG的Fc蛋白片段；GMCSF蛋白片段来自人GMCSF的GMCSF区域。

本发明的第二方面是提供了编码上述融合蛋白的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

本发明的第三方面是提供了一种含有IL7-Fc-GMCSF融合蛋白的表达载体，在表达载体中插入IL7-Fc-GMCSF融合蛋白，表达载体优选pCDNA3.4载体。

本发明的第三方面是提供了上述IL7-Fc-GMCSF融合蛋白的制备方法，包括如下步骤：

(1)对pCDNA3.4载体进行处理：用NotI/XbaI酶切