[发明专利]黄花棘豆内生真菌及其应用

说明书

本发明提供黄花棘豆内生真菌，所述黄花棘豆内生真菌为三线镰刀菌Fusarium tricinctum ZS‑1菌株，保藏编号：CGMCC 18596。本发明还提供该内生真菌提取物的提取方法及该提取物在抑菌中的应用。实验证明，黄花棘豆内生真菌提取物对耐甲氧西林表皮葡萄球菌，大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，霉菌均有良好的抑菌效果，对大肠杆菌的抑菌活性最佳，在兽药临床上具有广阔的推广应用价值。

技术领域

本发明涉及一株黄花棘豆内生真菌，还涉及该内生真菌提取物在抑菌中的应用。

背景技术

黄花棘豆(Oxytropis flavescens)是豆科棘豆属(Oxytropos)植物，其内生真菌能够通过产生一种吲哚里西定类生物碱而使黄花棘豆带有毒性。内生真菌(Endophyticfungus)是指部分生活史或几乎全部、甚至整个生活史都在各种健康组织、器官的内部或者细胞间隙中寄生，却不使寄主表现出明显感染病害症状的一类真菌。

近年来，因微生物病原体引起的多种疾病已受到人们更多的关注。表皮葡萄球菌感染率和死亡率随着临床中使用生物材料(假体，心脏瓣膜，骨髓移植等)的增加而上升，因此，临床上广泛使用甚至滥用抗生素，最终使表皮葡萄球菌出现对甲氧西林具耐药性的耐甲氧西林表皮葡萄球菌(methicillin resistant staphylococcus epidermis，MRSE)而成为一个巨大威胁；大肠杆菌(Escherichia coli，E.coli)存在于人类和动物的正常肠道微生物群中，有些菌株与人类关注的多种疾病有关；金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，S.aureus)可以引起包括金黄色葡萄球菌烫伤皮肤综合症、败血性关节炎、心内膜炎和呼吸问题在内的多种疾病，同时它也是引起肺炎的病原体之一；霉菌(moulds)是对丝状真菌的其中一类的俗称，生长速度快，可造成污染带来经济损失，使产业发展受阻，部分菌种为植物病原菌使植物死亡，部分菌种可使人或畜患病，常见的霉菌有青霉，曲霉，链霉等等。

目前研究表明，已从植物内生真菌分离出多种的活性物质(抗病毒类，抗菌类等)，其中一些新物质具有特殊的生物活性。对植物内生真菌产生的次级代谢物的研究表明其作用近似寄主植物，其中一部分拥有药用的潜力，一部分在经过抗菌筛选实验后确定具有不同程度的抑制多种常见的致使动植物患病的病原菌生长的活性，可用于为病害生物防治进行微生物制剂的研发。目前针对植物内生真菌有效物质的提取，通常多为针对发酵液或菌丝体，通过浓缩或萃取的途径提取，提取物通常为水提取物或醇提取物。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一株黄花棘豆内生真菌ZS-1。

本发明获得了黄花棘豆内生真菌ZS-1，并通过ITS全序列分析鉴定其种属，通过固体培养和液态发酵观察形态学特征和培养条件，在设计并进行预实验的基础上获得有效物质提取的最佳方法，并以四种病原菌(表皮葡萄球菌，大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，霉菌)为供试进行有效提取物质的抑菌活性研究，探究以揭示黄花棘豆内生真菌ZS-1有效提取物质的抑菌活性及最低抑菌浓度(MIC)值，以期确定黄花棘豆内生真菌ZS-1种属及有效物质的提取方法、抑菌特性，并为日后对其进行深入研究提供理论基础及依据。

本发明提供黄花棘豆内生真菌，所述黄花棘豆内生真菌为三线镰刀菌Fusariumtricinctum ZS-1菌株，保藏编号为CGMCC 18596，保藏日期为2019年10月21日，保藏中心为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

本发明提供上述黄花棘豆内生真菌提取物的提取制备方法，将培养黄花棘豆内生真菌的的平板表面菌丝和与菌丝粘连的固体培养基捣碎，加入超纯水超声后离心，取上清，利用旋转蒸发仪将水挥干，即为黄花棘豆内生真菌三线镰刀菌水提取物；

将培养黄花棘豆内生真菌的的平板表面菌丝和与菌丝粘连的固体培养基捣碎，加入无水乙醇后离心，取上清，先用旋转蒸发仪浓缩，再用水浴加热浓缩，收集浓缩提取物，即为黄花棘豆内生真菌三线镰刀菌乙醇提取物。