[发明专利]一种硫酸双肼屈嗪有关物质的高效液相色谱分析方法

说明书

本发明公开了一种硫酸双肼屈嗪及其有关物质的超高效液相色谱分析方法，使用Waters UPLC AcQuity H‑Class，采用反相C18柱，以磷酸二氢钾‑磷酸缓冲液为流动相A，以甲醇为流动相B进行梯度洗脱。本方法可通过加校正因子的主成分自身对照法有效控制已知杂质含量，主峰与相邻杂质峰及各杂质峰之间的分离度均大于1.5。采用本申请方法简单，便于操作，且重现性好，杂质分析定位准确，能为控制硫酸双肼屈嗪及其片剂质量提供可靠的分析方法。

技术领域

本发明涉及一种化学药物分析方法，具体地说是一种硫酸双肼屈嗪及其片剂有关物质的超高效液相色谱分析方法。

背景技术

硫酸双肼屈嗪(Dihydralazine sulphate)，化学名为1，4-双肼基-2，3-二氮杂萘硫酸盐二倍半水合物，其结构式如下所示：

硫酸双肼屈嗪为利尿药，临床常用于轻、中度高血压的辅助治疗。目前Journal ofthe Indian chemical society,1990,vol,67,P779-780公开了硫酸双肼屈嗪的合成方法，采用苯酐和水合肼环合反应得双酮屈嗪，然后氯代成二氯屈嗪，再与水合肼亲核取代、成盐得到硫酸双肼屈嗪。

目前仅有少数文献(《HPLC法测定复方硫酸双肼屈嗪片的有关物质》，吴珺、蔡鹏，中国药事[J]，2011，第25卷，第12期，第1222-1224页)，该文献报道复方硫酸双肼屈嗪片(硫酸双肼屈嗪原料和氢氯噻嗪)及其有关物质的检测方法，例如：通过酸碱，氧化，加热等破坏试验获得有关物质，进而考察复方硫酸双肼屈嗪片有关物质的检测分析方法。此外，而硫酸双肼屈嗪的10.0版EP药典仅研究了杂质C、D，2015版CP药典仅对未知杂质作限定，两个药典采用的分析方法均为离子对试剂，容易导致实际检验时平衡时间较长，且保留时间3分钟之前分离度较差。

本公司在生产硫酸双肼屈嗪及其片剂过程中，采用上述文献报道合成工艺，确定硫酸双肼屈嗪及其片剂的有关物质主要有6个，其中易于从反应原料中引入杂质E和F，反应过程中引入杂质A和B，产物降解引入杂质C和D。目前为止，尚未建立一套全面，有效，稳定分析硫酸双肼屈嗪及其片剂有关物质的分析方法，难以有效控制硫酸双肼屈嗪及其片剂的产品质量，为临床用药安全带来潜在风险。

发明内容

针对药典以及现有文献报道，本发明目的是建立一套全面，有效，稳定分析硫酸双肼屈嗪及其片剂有关物质分析方法。申请人通过大量的实验对硫酸双肼屈嗪及其片剂有关物质进行富集、分离提纯，鉴定了6个主要已知杂质，并且对杂质进行了溯源归属，其中包括从反应原料中引入杂质E、杂质F、反应过程中引入杂质A、杂质B及产物降解杂质C、杂质D，其结构式如下所示：。

本发明涉及一种硫酸双肼屈嗪及其片剂有关物质的高效液相色谱分析方法，包括如下步骤：

(1)样品配制：

对照溶液配制：精密称取杂质A、B、C、D、E、F，各约5mg于50ml容量瓶中，加稀释液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液储备液，量取上述各储备液1ml分别置100ml容量瓶中，稀释至刻度作为对照品溶液；

供试品溶液配制：取自制硫酸双肼屈嗪原料或片剂，用0.1％磷酸水溶液超声溶解，过滤，配制成浓度为1mg/ml的硫酸双肼屈嗪溶液；

(2)色谱条件与进样程序：

取步骤(1)配制的硫酸双肼屈嗪溶液、对照品溶液，精密量取供试品溶液与对照品溶液各2μl，分别注入液相色谱仪，进行梯度洗脱，记录色谱图，采用反相C18柱，柱温设置在5-25℃；以磷酸盐缓冲液为流动相A，以甲醇为流动相B，进行梯度洗脱，流速为0.2-0.5ml/min；检测波长为210-240nm，洗脱液由流动相A和流动相B构成。