[发明专利]一种提高抗菌肽BSN-37抑菌活性的方法

权利要求书

1.一种提高抗菌肽BSN-37抑菌活性的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、构建含有BSN-37基因序列的质粒PUC-BSN-37；

S2、将步骤S1构建的质粒PUC-BSN-37导入空载体pCold-SUMO-硫氧还蛋白，得重组质粒；

S3、将步骤S2制得的重组质粒用无菌水稀释至25ng/μL，向其中加入由糖皮质激素及丹参提取物按质量比1～2：7～9组成的混合物，即可。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗菌肽BSN-37的氨基酸序列信息如SEQID NO.1所示。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述PUC-BSN-37质粒的构建过程为：根据氨基酸序列和大肠杆菌偏爱密码子的特性，反向翻译出其基因片段，加上限制性内切酶BamHI和Xho I、GST标签、终止子和保护碱基，合成BSN-37的基因，大小为126bp，并将其克隆在PUC57载体中，即得。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述BSN-37基因序列信息如SEQ ID NO.2所示，所述加上限制性内切酶BamH I和Xho I、GST标签、终止子和保护碱基后的BSN-37的基因序列如SEQ ID NO.3所示。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中重组质粒的构建过程为：

(1)根据酶切位点BamH I和Xho I设计扩增BSN-37基因序列的引物，并利用PCR技术扩增目的片段，将目的基因测序并酶切纯化，得经酶切的目的片段；

(2)将载体pCold-SUMO-硫氧还蛋白甘油菌划线于Amp平板上，于37℃下培养13-15h，然后挑取单个菌落接种到含Amp的LB液体培养基中，37℃，200rpm震荡培养15h，利用试剂盒提取质粒，并用相同的酶切，得经酶切的pCold-SUMO-硫氧还蛋白质粒；

(3)将步骤(1)所得经酶切的目的片段与步骤(2)所得经酶切的pCold-SUMO-硫氧还蛋白质粒连接，即得。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中扩增BSN-37基因序列的引物为Primer-BSN，上游引物为Primer-BSN-F，序列信息如SEQ ID NO.3所示，下游引物为Primer-BSN-R，序列信息如SEQ ID NO.4所示；

所述PCR技术的扩增过程为：配制20μL的PCR反应体系，包含2×Taq PCR Master Mix10μL，Primer-BSN-F 2μL，Primer-BSN-R 2μL，步骤S1所得质粒PUC-BSN-37 2μL，双蒸水4μL；反应条件为95℃ 5min；95℃ 30s，58℃ 30s，72℃ 30s，38个循环，72℃延伸10min，4℃保存；

所述酶切过程为，将经PCR技术获得的目的基因PUC-BSN-37 10μL，10×Green buffer3μL，Xho I 1.5μL，Hind III 1.5μL，双蒸水4μL配成20μL的酶切体系，于36℃条件下酶切2h，经测序鉴定序列信息及长度，即可。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的酶切过程为：pCold-SUMO-硫氧还蛋白2μL，10×Green buffer 3μL，Xho I 1.5μL，Hind III 1.5μL，双蒸水4μL配成20μL的酶切体系，于36℃条件下酶切2h，经测序鉴定序列信息及长度，即可。

8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的连接过程为：取步骤(1)所得经酶切的目的片段6μL，步骤(2)所得经酶切的pCold-SUMO-硫氧还蛋白质粒8μL，T4 DNALigease 1.5μL，10×Ligation buffer 2.5μL，双蒸水2μL，配制成20μL的连接体系，放入金属浴中，于16℃连接6h，经测序鉴定，即可。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述由糖皮质激素及丹参提取物按体积比1～2：7～9组成的混合物的加入量为总体积的0.1～0.15％。