[发明专利]一种新型的基因编辑动物生物反应器制备方法及应用在审
| 申请号： | 202010509426.5 | 申请日： | 2020-06-08 |
| 公开（公告）号： | CN111718932A | 公开（公告）日： | 2020-09-29 |
| 发明（设计）人： | 孙照霖;王晶;王明;乔春霞;罗龙龙;李新颖;杨光;冯健男;沈倍奋 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/13;C12N15/90;C12N15/89;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京慧尚知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11743 | 代理人： | 吉海莲;鲍晓芳 |
| 地址： | 100089*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 新型 基因 编辑 动物 生物反应器 制备 方法 应用 | ||
1.一种新型的基因编辑动物生物反应器，其特征在于，其制备方法包括如下步骤：
(1)选择动物基因组内的“安全位点”作为目的基因精确敲入的位置，完成此目的需要通过构建针对上述安全位点的基因编辑敲除载体；
(2)构建含有两个同源臂5-ARM和3-ARM的目的基因供体载体，所述目的基因由全身性的广泛表达启动子启动；
(3)通过原核注射或细胞筛选或体细胞克隆方法将基因编辑敲除载体，gRNA和含有目的基因的供体载体注射基因编辑动物受精卵制备基因敲入基因编辑动物；
(4)通过PCR方法鉴定阳性动物；
(5)利用ELISA方法检测阳性动物的奶、唾液及血液中目的蛋白的表达情况，即获得高表达动物生物反应器。
2.根据权利要求1所述的基因编辑动物生物反应器，其特征在于，所述“安全位点”包括ROSA26、H11、HPRT。
3.根据权利要求1所述的基因编辑动物生物反应器，其特征在于，所述基因编辑方法包括ZFN,TALEN或者Cas蛋白。
4.根据权利要求1所述的基因编辑动物生物反应器，其特征在于，所述启动子包括CAG,EF-1a,PGK。
5.根据权利要求1所述的基因编辑动物生物反应器，其特征在于，所述基因编辑动物包括小鼠、羊或牛。
6.根据权利要求1所述的基因编辑动物生物反应器，其特征在于，所述的目的蛋白为抗肠毒素B单克隆抗体。
7.权利要求1～6任意一项所述的基因编辑动物生物反应器在制备药用蛋白质中的应用。
8.权利要求1～6任意一项所述的基因编辑动物生物反应器在制备药用工业酶中的应用。
9.权利要求1～6任意一项所述的基因编辑动物生物反应器在制备药用疫苗中的应用。
10.权利要求1～6任意一项所述的基因编辑动物生物反应器在制备药用单克隆抗体、药用蛋白中的应用。
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