[发明专利]以麻疹病毒为载体的麻疹、风疹联合疫苗

说明书

本发明的目的在于，提供一种以麻疹病毒为载体的麻疹、风疹联合疫苗，属于重组载体疫苗领域。本发明首先公开了一种感染性克隆，所述感染性克隆是将风疹病毒的ORF2(包含C基因、E2基因、E1基因)片段构建到质粒载体所得到的重组质粒；所述重组质粒包括麻疹病毒反基因组序列。本发明还公开了一种重组病毒，该病毒是由前述感染性克隆通过转染细胞拯救得到。本发明的联合疫苗是以前述重组病毒为免疫原制备得到，能够诱导机体产生抗风疹和麻疹的特异性抗体，效果出众。

技术领域

本发明属于重组载体疫苗领域。

背景技术

麻疹病毒(measles virus)是麻疹的病原体，属于副粘病毒科麻疹病毒属。麻疹是儿童常见的一种急性传染病，其传染性很强，以皮丘疹、发热及呼吸道症状为特征。若无并发症，愈后良好。我国自60年代初应用减毒活疫苗以来，儿童的发病率显著下降。但在发展中国家仍是儿童死亡的一个主要原因。

麻疹减毒活疫苗“沪-191”株(MV-S191)是我国麻疹疫苗的生产株之一，至今已有近55年的历史。已有研究表明：“沪-191”麻疹疫苗接种后3～10年以上儿童抗体阳性率高，阳性率80.6％，抗体水平均值为108.42IU/L，提示接种麻疹疫苗后远期具有较高的保护性抗体水平，说明MV-S191麻疹疫苗具有良好的免疫原性。

风疹病毒是单股正链RNA病毒，属于披膜病毒科(togavirus)麻疹病毒属。风疹病毒基因组包含了大约9800个氨基酸，具有传染性，病毒粒子电镜下多呈不规则球形，具多形性，直径50～85纳米，有包被膜。除了来自宿主细胞的结构复杂的脂质包膜外，风疹病毒包含了3个蛋白，E1和E2嵌在包膜上形成刺突，C蛋白形成衣壳。E1是糖蛋白，有中和表位和血凝表位，分子上包含重要的T细胞、B细胞和抗体中和表位，在动物体内能够诱导体液免疫和细胞免疫。糖蛋白E2的功能目前尚不清楚。这三个蛋白，其分子量分别为60kD(E1)、42～47kD(E2)和30kD(C)，来源于245kD的mRNA翻译的110kD的多肽。风疹病毒的抗原结构相当稳定，只有一个血清型。

风疹病毒易发生垂直感染，孕妇妊娠早期初次感染风疹病毒后，病毒可通过胎盘屏障进入胎儿，常可造成流产或死胎，还可导致胎儿发生先天性风疹综合征，引起胎儿畸形。

风疹疫苗，是预防控制风疹疾病的疫苗。美国、英国在20世纪60年代末、70年代初开始推广风疹疫苗，以后世界各国开始相继使用。商品化的风疹疫苗株有HPV77-DE5株、Condehilly株、RA27/3株、T0336株和BRD-II株。其中RA27/3疫苗已与麻疹、腮腺炎、水痘制成麻疹风疹二联疫苗(MR)，麻疹风疹腮腺炎三联疫苗(MMR)或麻风腮-水痘四联疫苗(MMRV)，并广为使用。

重组载体疫苗是一种整合多个病毒基因的新型疫苗。其原理是：将病毒A的中和表位基因片段插入到病毒B的基因组中，获得一种重组病毒，该病毒可以表达病毒A的中和抗原(或进一步形成病毒A的病毒样颗粒)，可引发机体产生相应抗体，并产生针对病毒A和B的记忆B细胞和T细胞。将此重组病毒作为免疫原，制备得到的疫苗，即为重组载体疫苗。重组载体疫苗仅需培养一种毒株，制备出一种高滴度病毒，选择一种病毒的冻干稳定剂和冻干工艺。

目前，我国计划免疫8月龄的麻疹风疹减毒活疫苗是由麻疹病毒减毒毒株(麻疹疫苗沪191株)和风疹病毒减毒株(BRD-II株或RA27/3株)分别接种鸡胚细胞和人二倍体细胞，经培养、收获病毒液，按比例混合配制，加适宜稳定剂冻干后制成。尚未见将风疹病毒的结构蛋白(形成病毒样颗粒)基因构建入麻疹病毒反基因组的重组麻疹载体疫苗。

发明内容

本发明要解决的问题是：提供一种麻疹-风疹二联疫苗毒种以及相关重组载体疫苗疫苗。

本发明的技术方案如下：

本发明首先提供了一种感染性克隆，所述感染性克隆是将风疹病毒的ORF2片段构建到质粒载体所得到的重组质粒；